重组hNIS基因转染QBC939细胞介导27125Ⅰ摄取的实验的分析

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1、华中科技大学硕士学位论文重组hNIS基因转染QBC939细胞介导125I摄取的实验研究华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科硕士研究生：张先林导师：丁志强教授中文摘要【目的】通过获取人钠/碘同向转运体(hNIS)基因cDNA并构建真核性表达载体hNIS-DNA-PDC316，研究其转染至胆管癌细胞系QBC939细胞的表达水平及对介导125I摄取的影响。【方法】通过RT-PCR从人原发性甲状腺功能亢进的组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列，将其克隆至pMD18-T载体，筛选后亚克隆hNIS可编码序列至真核表达型PDC316质粒载体中，经脂质体2000

2、转染法将真核性表达载体hNIS-DNA-PDC316转入胆管癌细胞（QBC939），建立新的胆管癌细胞系(QBC939-A)，并设立空质粒(QBC939-B)和空白(QBC939-C)对照组,转染后在体外培养条件下采用半定量RT-PCR方法检测2、3、6d三组QBC939细胞内hNIS-mRNA的表达水平和转染后1、2、3、4，5，6d三组QBC939细胞对125I摄取情况。【结果】经琼脂糖凝胶电泳和DNA序列分析结果显示与文献报道的序列完全一致,并建立了能在短期内稳定表达hNIS基因的新型胆管癌细胞系QBC939-A。经半定量RT-PCR检测hNIS-mRN

3、A表达水平显示，QBC939-A第3d表达量达到高峰，与QBC939-B和QBC939-C比较，有明显差异（P<0.05）。而且QBC939-A细胞的摄碘能力在转染后3d达到高峰，比QBC939细胞约高14倍，比QBC939-B约高16倍。2华中科技大学硕士学位论文【结论】从原发性甲亢组织中成功克隆了hNIS基因的可编码序列并构建了能在QBC939-A中稳定表达hNIS-mRNA的重组真核表达质粒载体hNIS-DNA-PDC316，而且hNIS基因转导胆管癌细胞足以在短期介导125I的摄取，为下一步介导125I靶向作用胆管癌奠定了基础。【关键词】钠/碘转运体；

4、反转录-多聚酶链反应；重组质粒；胆管癌细胞；碘放射性同位素；3华中科技大学硕士学位论文ExperimentalstudyonthetransferoftherecombinanthNISgeneinduces125IuptakeinhumanbileductcarcinomaQBC939cellsGraduate:ZhangXianlinTutor:Prof.DingzhiqiangABSTRACT【Objective】ExtractinghumanNISgenefromthehyperthyroidismtissueandconstructaeukaryot

5、icexpressionvector（hNIS-DNA-PDC316）andtransfectingthehNISgeneintocholangiocarcinomacelllineQBC939，expressionlevelandeffectofuptakinginduces125IofhNISgenewerestudiedincelllines.【Methods】AmplificatedthehNIScDNAsequencebyRT-PCRonthyroidtissueofhyperthyroidismpatientandligatedwithplasmi

6、dpMD18-T,afterselecting,encodingsequenceofhNISwassubcloned,ligatingwitheucaryoticexpressingplasmidPDC316,usinglipofectaminetotransfecteucaryoticexpressingplasmidvectorhNIS-DNA-PDC316（experimentalgroup）andplasmidPDC316（controlgroup）intocholangiocarcinomacelllinesQBC939,establishingth

7、reenewcelllines(QBC939-A,QBC939-BandQBC939-C).TheexpressionlevelofhNISgenewasdetectedbysemi-quantitativeRT-PCRin2-,3-,and6dayandeffectofuptakinginduces125Iwerestudiedinthe1-,2-,3-,4-，5-，and6dayincelllinesofvitroculture.TheexpressionpeakofhNISgeneisthe3thdayinQBC939-Adetectedbysemi-q

8、uantitativeRT-PCR.【