htert启动子调控hnis基因转染胶质瘤细胞介导放射性碘治疗动物水平的研究

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1、天津医科大学硕士学位论文研究目的中文摘要神经胶质瘤是人类生存预后最差的肿瘤之一，具有高病死率、低治愈率的特点，治疗效果总是不理想。当前肿瘤治疗中研究的热点问题是基因治疗，放射性131I治疗又是一种相对高效又安全的治疗方法，因此我们设想将两种方法联合起来来治疗神经胶质瘤。放射性131I对分化型甲状腺癌纽胞具有着高效、特异性的杀伤效果，其摄碘和贮碘的分子基础在于甲状腺细胞膜上存在着人钠碘转运体(hNIS)这两种编码蛋白。我们设想将这两种蛋白的编码基因通过合适的载体重组到神经胶质瘤细胞内并伎其在细胞表面特异性的表

2、达，从而介导放射性碘治疗。本研究引入人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子，拟构建并应用重组腺病毒作为基因转移载体，将hNIS基因转染入胶质瘤细胞，同时建立神经胶质瘤的动物模型，并进一步分析hTERT靶向性引导hNIS在胶质瘤细胞中特异性表达的情况，评价放射性”1I对胶质瘤的杀伤效果。方法1、验证端粒酶在神经胶质瘤细胞中的表达活性，通过PCR技术对hTERT核心启动子进行扩增和克隆；以腺病毒为载体构建以hTERT为启动子的hNIS基因的重组腺病毒；进行westonblot分析对重组腺病毒进行鉴定。2、建立U8

3、7细胞的裸鼠荷瘤模型，在动物实验水平研究hNIS转染后介导的胶质瘤放射性核素99mTc04一显像、㈣I全身显像、裸鼠移植瘤及其他脏器摄取t31I能力及感染病毒后放射性碘治疗对神经胶质瘤荷瘤裸鼠的治疗作用结果1、成功构建并鉴定了含hTERT启动子及hNIS基因的重组腺病毒Ad—hTERT-hNIS。2、成功建立U87细胞的裸鼠荷瘤模型，感染病毒Ad—hTERT-hNIS后，转染hNIS基因的移植瘤99mTc04显像、131I显像均阳性。3、对放射性核素川I显像后的裸鼠各脏器进行放射性计数分析，肿瘤组织的放射性

4、计数仅次于甲状腺组织，将肿瘤组织送病理进行免疫组织化学分析，hNIS天津医科：赶学硕士学位论文蛋白表达阳性。4、神经胶质瘤的放射性碘治疗实验，实验组较对照组肿瘤细胞体积缩小明显，裸鼠的中位生存期明显延长，将放射性碘治疗后的裸鼠肿瘤组织送病理，发现大片状的细胞组织坏死。结论在胶质瘤U87和U251中均存在端粒酶的表达，因此hTERT启动子可以引导hNIS基因在胶质瘤细胞中的特异性表达。本研究将携带hTERT启动子、hNIS基因的重组腺病毒成功感染胶质瘤细胞后，胶质瘤细胞可以使其获得较强的摄碘能力，在裸鼠体内实

5、验中感染腺病毒Ad。hTERT-hNIS后能成功介导放射性碘杀伤胶质瘤细胞，延长裸鼠生存周期。关键词：胶质瘤重组腺腺病毒放射性碘治疗hTERT启动子h⋯SAbstractObjective：Gliomaisoneoftheworstofhumansmwivalprognosistumors，withahi吐斌aJjtyrateandthecharacteristicsoflhelowcurerate．theefficacyisnotalwavs1deal．Ahottopicincurrentc{mcerre

6、searchisgenetherapy，1311treatmentisare㈨VelYefficientalldsafemethodoftreatment，weassurnethatbandingthetwornethodstogethertotreatglioma．川Ifordifferentiatedthyroidcancerwitllhighe娜ciencyandspeci五citvofant卜eflect，themolecularbasisofitsiodineuptakeandstorageofi

7、odineisthatthecellmembranecontainsthesetwoencodedproteinsofthehulTlansodhlnliodidesymporter(hNIS)·Weassulnethatthesetwoproleincodinggenesclonedintogliomacellsforspecificexpress．ion，thenradioactiveiodinetreatment．INss‘udYInt。oduceshumantelomerasereversetran

8、scriptase(hTERT)pro啪ter，tobuiltandapplyrecombinantadenovirusasagenet㈨sfervector．thehNISgene'stranstkctionintogliomacells．whileestablishinggliomaanimaimodel，and矗jnheranalYsisofthehTERT’stargetedguidinghNIS—spe