egr-1启动子调控hnis基因转染介导宫颈癌放射性核素显像和治疗的研究

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2、hNIS基因转染介导宫颈瘵放射性核素显像和治疗研究中文摘要Egr-1启动子调控的hNIS基因转染介导宫颈癌放射性核素显像和治疗研究中文摘要目的构建含早期生长反应基因一l(Egr一1)启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组质粒，并转染至人宫颈癌Hela细胞中特异性表达。探讨Egr-1启动子调控的hNIS基因介导宫颈癌放射性核素显像和治疗的可能性。方法1．提取FL*-hNIS／pcDNA3质粒，并以Egr-1／pMRl8T为模板PCR扩增Egr-1启动子序列，亚克隆至FL幸--hNIS／pcDNA3质粒，构成重组质粒Egr-1-hNIS／pcDNA3，酶切电泳鉴定。2．将Egr-1

3、-．hNIS／pcDNA3质粒转染至人宫颈癌Hela细胞中，(3418筛选出细胞克隆，流式细胞仪筛选出hNIS表达率最高的细胞株Hela-Egr=l-hNIS。同法以FL*-hNIS／pcDNA3质粒转染并筛选出的Hela-FL*-hNIS细胞株作为阳性对照，未转染的Hela细胞作为阴性对照，RT-PCR鉴定hNIS基因的表达。3．碘摄取实验、NaCl04抑制实验及碘流出实验评价细胞体外摄碘功能，克隆形成实验评价碘-131对细胞的体外治疗效果；Hela--Egr-1--hNIS细胞另外给予不同剂量的X线辐照后再行碘摄取实验及碘流出实验，评价Egr-1启动子对hNIS蛋白功能的辐射诱导

4、作用。4．建立Hela--FL*．-hNIS细胞、Hela--Egr-l-hNIS细胞及Hela细胞荷瘤裸鼠模型。用Nal25I进行体内分布，计算不同时间点移植瘤及各主要脏器组织的％D僧和瘤体／非瘤体组织放射性计数比值(T／NT)；进行Nal31I及99mTc04-显像，观察比较移植瘤的显像情况，分析瘤体与对侧相应部位正常软组织的比值(T／B)。结果1．本研究成功扩增出Egr-1启动子，并成功构建出重组质粒Egr-1-．hNIS／pcDNA3，经酶切电泳鉴定正确。T中文摘要Egr-1启动子调控的hNIS基冈转染介导宫颈癌放射性核素娃像和治疗研究2．Egr-I-hNIS／pcDNA3和

5、FL*-．hNIS／pcDNA3质粒成功转染入Hela细胞中，流式细胞仪分别筛选出hNIS表达效率最高的稳定细胞株，表达率分别为11．2％和10．14％。RT-PCR结果示Hela-Egr一1--hNIS组及阳性对照组均有hNIS基因表达，阴性对照组无表达。3．碘摄取实验示Hela-Egr一1-hNIS细胞和Hela-FL*--hNIS细胞摄碘能力比阴性对照Hela细胞分别提高了13倍和21倍，且摄碘能力均能被NaCl04抑制。Hela--Egr一1--hNIS细胞辐照后的摄碘能力增加，大致呈剂量依赖性；辐照后的碘流出无明显变化。131I体外治疗实验示Hela--Egr一1--hNI

6、S、Hela--FL*-hNIS和Hela的克隆形成率分别为(50．494-9．75)％、(6．70±1．57)％和(86．32--+6．56)％。4．Hela--Egr一1--hNIS细胞荷瘤裸鼠模型Nal25I体内分布实验示移植瘤可明显聚集Nal25I，1"-"12h期间肿瘤组织的％ID／g明显高于除甲状腺和胃以外的各组织脏器，T／NT值在3h时基本达到最高值。Nal31I显像示移植瘤部位明显浓聚放射性，T／B值在4h时最高，为4．05。∞mTc04’显像示移植瘤部位放射性持续浓聚至48h，T／B值在19h达最高值9．13。两种显像各时间点T／B值均高于阳性对照组。结论1．成功建

7、立了Egr-1启动子调控的稳定表达hNIS蛋白的Hela--Egr-1--hNIS细胞系，该细胞系具有较强的摄碘功能，且具有一定的辐射诱导作用。2．Hela-Egr一1-hNIS细胞荷瘤裸鼠移植瘤可明显聚集Nal25I。Nal31I及‰4一显像结果提示Hela-Egr一1-hNIS细胞初步形成了体内的摄碘正反馈链，有望在体内治疗中获得更好的治疗效果。关键词：Egr-1；钠碘转运体；宫颈癌；放射性核素Ⅱ作者：许袁琦指导教师：唐军石怡珍Egr-I启动子调控的h