左旋多巴苄丝肼微球减少帕金森病大鼠异动症

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1、上海交通大学博士学位论文左旋多巴/苄丝肼微球减少帕金森病大鼠异动症姓名：杨新新申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：刘振国20120509上海交通大学医学院博士学位论文左旋多巴／苄丝肼微球减少帕金森病大鼠异动症摘要帕金森病(Parkinson’disease，PD)是老年人常见的神经系统变性疾病，它以黑质多巴胺能神经元变性丢失为主要的病理特征。临床主要表现为震颤、肌强直、运动迟缓及姿势步态异常。目前，左旋多巴是治疗帕金森病的金标准，然而左旋多巴治疗5．10年后病人将会出现各种并发症，其中异动症(1evodopa-induoeddyskinesia，Lm)就是其中之一。LID

2、的发病机制目前尚不清楚，其核心原因可能是由于波动性的多巴胺刺激导致纹状体中PKA通路的过度活化。PKA活化后激活下游一系列的底物从而引起即早基因的表达，最终导致异动症的发生。除多巴胺受体参与异动症的发生外，非多巴胺受体与异动症的发生也有密切关系，特别是谷氨酸受体如Glugl可以通过磷酸化来调节它的功能参与异动症的发生。研究发现持续性多巴胺刺激有助于减少帕金森病异动症的发生。为此，本文利用可降解生物材料聚乳酸．羟基乙酸共聚物(PLGA)包裹左旋多巴／苄丝肼制作微球，这种微球可以均匀缓慢的释放出包裹的左旋多巴／苄丝肼，同时利用6．羟基多巴胺(6．OHDA)颅内注射制作帕金森病大鼠模

3、型，观察微球在预防及减少帕金森病大鼠异动症发生中的作用并探讨其可能机制。本课题共分为五个部分：第一部分：包裹左旋多巴，苄丝胼PLGA微球的制备与体内外释放动力学目的：利用PLGA包裹左旋多巴／苄丝肼合成一种可缓慢释放左旋多巴／苄丝肼的微球。方法：利用扫描电镜观察微球的形态，高效液相法检测微球的体内外释放动力学及大鼠的血药浓度。结果：微球呈圆形，大小均匀，体内外释放曲线表明微球可以平稳缓慢的释放出其所包裹的左旋多巴／苄丝肼，无突释现象发生。结论；包裹左旋旋多巴／苄丝肼PLGA微球可以平稳缓慢的释放出包裹的左旋多巴／苄丝肼。第二部分：缓释左旋多巴／苄丝肼微球改善帕金森病大鼠运动症状

4、的实验研究目的：观察包裹左旋多巴／苄丝肼PLGA微球对PD大鼠运动症状的影响。上海交通大学医学院博士学位论文方法：通过6-OHDA立体定向注射至SD大鼠右侧前脑内侧束建立单侧PD大鼠模型，选取制模成功大鼠给予普通剂型左旋多巴(12mg／l(g)／苄丝肼(1Sm#g)或等剂量微球皮下注射，计数阿朴吗啡诱导的旋转圈数，同时对帕金森病大鼠行前肢功能测定。结果：微球与同等剂量的左旋多巴／苄丝肼可以相同程度的降低帕金森病大鼠阿朴吗啡诱导的旋转圈数，前肢功能测定结果显示微球可以持续改善帕金森病大鼠的前肢功能，而普通剂型左旋多巴／苄丝肼治疗后期其改善PD大鼠前肢的功能逐渐减弱。结论：微球与相

5、同剂量的普通剂型左旋多巴／苄丝肼可以相同程度的改善PD大鼠的运动症状。第三部分：缓释左旋多曰苄丝肼微球预给药减少帕金森病大鼠异动症发生的实验研究目的：观察包裹左旋多巴／苄丝肼PLGA微球预给药对PD大鼠异动症发生的影响并探讨其机制。方法：通过6．OHDA立体定向注射至SD大鼠右侧前脑内侧束中建立单侧PD大鼠模型，将制模成功的PD大鼠分别给予微球或等剂量的普通剂型左旋多巴(12mg／k酽警丝肼15mg／kg)皮下注射治疗。治疗2周后对大鼠行异常不自主运动(AIM)评分，并利用WesternblotjfⅡ免疫组化方法检测帕金森病大鼠纹状体中磷酸化多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白．3

6、2(DARPP-32)、细胞外信号调节激酶(ERKl／2)的表达。同时利用Westernblot法检测帕金森病大鼠纹状体中AFosB的表达。结果：微球在减少帕金森病大鼠AIM评分的同时也减少了帕金森病大鼠纹状体中磷酸化DARPP．32、ERKl／2的水平以及AFosB的表达。结论：微球预给药可以减少帕金森病大鼠异动症的发生，可能是由于微球下调了帕金森病大鼠纹状体中PKA通路的活性。第四部分：缓释左旋多巴／苄丝肼微球治疗异动症大鼠的实验研究目的：观察包裹左旋多巴／苄丝肼PLGA微球对异动症大鼠的影响并探讨其分子机制。方法：通过6．OHDA立体定向注射至SD大鼠前脑内侧束中建立单侧

7、PD大鼠模型，将制模成功的PD大鼠给予左旋多巴腹腔注射治疗(25mVkg+12．5mg／kg苄II上海交通大学医学院博士学位论文丝肼，每天2次)3NN做异动症大鼠模型，将制模成功的异动症大鼠模型分别给予普通剂型的左旋多I田．(12mg／kg+苄丝肼15mg／kg)．或等剂量微球皮下注射治疗三周，在给药的第1、5、10、15和20天计数阿朴吗啡诱导的旋转圈数，并行AIM评分。利用Westernblot；N免疫组化方法检测异动症大鼠纹状体中磷酸化Tau蛋白、磷酸化Akt的水平，同时利用ELISA