let-7b在皮肤创伤愈合中的功能研究

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1、Let．7b在皮肤创伤愈合中的功能研究FunctionAnalysisofLet-7bincutaneouswoundhealing2014年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：炭延如，r年∥月∥日学位

2、论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名：殳链山脚年／

3、月≠日指导教师签名：办仲年江苏大学硕士学位论文中文摘要皮肤是能够直接与外界环境接触的器官，对人体有着非常重要的作用，并且皮肤表皮及其它的附属物可作为一个保护屏障，阻挡病原物及其异物的侵入，并且能够防止身体内部体液的流失，然而皮肤创伤愈合是一个复杂的，多因素参与的过程，由于疾病或者受伤导致皮肤屏障的破坏，有可能引起感染、溃疡、疤痕形成、甚至发展为慢性伤口等并发症，严重影响着人们的正常生活，了解创伤愈合过程中发挥作用的各个因素，对于指导临床促进创伤愈合，以及创伤的治疗有重要的意义。miRNAs是一类长度为19．24个核苷酸的非编码单链小

4、分子RNA，在进化上具有高度保守性，通常以单拷贝、多拷贝或基因簇等形式存在于基因组中。成熟的面RNA能够与靶标mRNA分子的3’末端非翻译区特异性结合，形成RNA沉默复合体(RISC)，RISC对靶标基因mRNA产生抑制性信号，使蛋白表达受到抑制，或直接导致mRNA的降解，参与转录后基因表达调控，近年来已发现在创伤愈合的不同阶段都有特定的miRNA发挥重要的作用。Let一7是最先在线虫中被发现的一类miRNA，其生物学功能十分广泛，在细胞的迁移与增殖、肿瘤发生的过程中都发挥了非常重要的功能。目前let．7b只在体外进行了一些功能研究

5、，它能够抑制黑色素瘤细胞增殖，但是关于皮肤创伤愈合中发挥的具体功能尚未见报道。为了研究let-7b在皮肤创伤愈合中的功能，我们首先在HaCaT细胞中过表达了let-7b，发现过表达let-7b能抑制HaCaT细胞迁移，但不影响细胞增殖和凋亡过程。为了确定let-Tb在体内的功能，利用受精卵显微注射的方法构建了在皮肤角质细胞中特异过表达1et．7b的转基因小鼠。通过对转基因小鼠皮肤创伤愈合过程的观察和分析，发现let-Tb导致了小鼠皮肤创伤愈合的重上皮化速度减慢。进一步研究证实，let-To不影响细胞增殖而是抑制角质细胞的迁移来影响整

6、个创伤愈合过程。通过生物信息学的方法预测了let．7b的靶分子，挑选与迁移相关分子进行荧光素酶报告基因活性分析实验，发现lgf2bp2，Limidl，Vangl2是let．7b的靶分子。进一步研究发现IGF2BP2在小鼠创伤后表达量上升，尤其在创伤的前缘，提示IGF2BP2在创伤愈合过程中发挥重Let-7b在皮肤剑伤愈合过程中的功能研究要的作用。IGF2BP2能促进HaCaT细胞的迁移，并能激活ERK信号通路；I-IaCaT细胞过表达let．7b后，IGF2BP2表达下降，ERK信号通路明显受到阻滞。这一结论也在let一7b转基因小

7、鼠得到了证实。本研究首次利用体内和体外模型系统研究了let-Tb在皮肤创伤愈合过程中作用，阐明了let．7b在创伤愈合过程中功能，揭示了let-7b靶向IGF2BP2来抑制ERK信号通路从而抑制细胞迁移的分子机制。关键词：皮肤创伤，let-Tb，抑制迁移，IGF2BP2，p-ERK江苏大学硕士学位论文Theskinisthelargestorganofthebody,accountingfor～15％oftotalbobyweightinadulthumans．Theskinprotectsthebodyagainstenviron

8、mentalhazardsandpreventsdehydration。Epidermisanditsappendagescanbeuesdasaprotectivebarrierandblocktheforeignmatterinv