切口痛大鼠脊髓水平toll样受体4及炎性细胞因子的变化

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1、郑州大学硕士学位论文切口痛大鼠脊髓水平toll样受体4及炎性细胞因子的变化姓名：李艳娜申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：张卫201204摘要切口痛大鼠脊髓水平toll样受体4及炎性细胞因子的变化硕士研究生李艳娜导师张卫郑州大学第一附属医院麻醉科中国郑州450052术后疼痛(postoperativepain)又称急性伤害性疼痛，不同于一般的生理性疼痛，是手术后即刻发生的急性疼痛(通常持续时间不超过7d)，是临床最常见和最需紧急处理的急性疼痛。文献报道75％以上的患者术后承受不同程度的疼痛，将导致机体病理生理的改变，产生一系列不良反应，如心率加快、心脏负荷增加、呼吸浅快、胃肠蠕动减慢、

2、免疫功能下降等，严重影响患者术后的治疗和生活质量。目前，对术后疼痛的机制研究主要集中在外周和中枢敏化上，众多研究表明，炎症因子与术后疼痛关系密切，如炎症因子IL-I[3、IL-6、TNF．Q等能引起中枢或外周敏化，在术后急性疼痛的发生发展中发挥重要作用。％n样受体4{TollliIceReceptor4，TLR4)是Toll样受体家族重要成员之一，广泛表达于各细胞系，在中枢神经系统，主要表达于小胶质细胞和星形胶质细胞，是联系天然免疫和后天免疫的桥梁。TLR4识别外源性配体如脂多糖(【，PS)或内源性配体如热体克蛋白(HSP)后被激活，通过髓样分化因子88(Myeloiddifferenti

3、ationfactorMyD88)依赖性途径或MyD88j#依赖性途径，进而介导炎症因子(IL．1p、IL-6、TNF-a、IFN-y)的大量合成与释放，引发炎症反应。Tanga、Wadachi、Raghavendra等在神经病理性疼痛、炎性疼痛模型中研究发现，位于脊髓胶质细胞上的TLR4及下游细胞因子舞高，其介导的炎症反应在痛觉信号传导过程中发挥关键作用，但其在术后急性疼痛模型中的作用尚未见报道。在手术创伤和应激条件下，TLR4可识别内源性损伤相关分子(DAMPs)，如高迁移率簇蛋白l、热休克蛋白、细胞外基质分解产物等内源性配体，促进细胞因子的合成与释放，引发无菌性炎症反应，但围术期这种

4、无菌性免疫炎症反应摘要是否参与了术后疼痛的形成与发展尚不清楚。在术后疼痛模型中，研究发现脊髓胶质细胞被激活，主要是由子伤害性信号沿襁级传入纤维至脊髓背角引起，在该神经传导通路中TLR4是否被激活并不清楚。本研究首次提出了TLR4介导的炎症反应参与了术厝疼痛的发生发展这一假设。目的本研究采用大鼠切口痛模型，观察脊髓水平TLR4mRNA及炎性细胞因子IL-1[3mRNA、州F．amRNA表达的变化，探讨TLR4信号转导通路在术后疼痛中的作用，从而为术后急性疼痛的治疗寻找新靶点。材料和方法l材料健康成年雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠58只，体重180—2209，由郑州大学实验动物中

5、心提供。2方法按照Brennan等提出的方法建立大鼠切口痛模型，吸入2％异氟醚麻醉后，在大鼠左后爪从足底近端0．5cm处向趾部作长约lcm的纵行切口，深及皮下筋膜，然后用眼科镊挑起足底肌肉并做纵向切割，但保持肌肉的起止及附着点的完整性，按压止血后，用5-0尼龙线缝合皮肤两针，手术切口处给予碘伏消毒并覆盖抗生素软膏，即完成模型制各。行为学检N-分别在手术前oh、术后O．强、孙、2h、8h、12h、ld、2d、3d、5d、7d应用电子yonFrey测定大鼠手术侧和非手术侧的机械缩足反应阈值(mechanicalwithdrawalthreshold，MWD。生化检测：分别在手术前醢、术后强、8

6、h、ld、2d、3d、5d、琵各取6只大鼠取簇段脊髓(L4．6)，采用荧光定量PCR(Real．TimePCR)方法检测脊髓TLR4mRNA、IL．I13mRNA、TNF．amRNA的表达。II摘要结果l切口痛大鼠机械缩足反应阈值(mechanicalwithdrawalthreshold，MWT)的变化所有大鼠术蘸左右脚MWT基础值无明显差异，手术侧(左脚)术后O。5h开始下降，在2h时下降最显著，与术前和非手术侧(右脚)MWT相比，均有统计学差异(P0．05)。2切口痛大鼠脊髓水平TLR4mRNA

7、的变化术前大鼠脊髓中即有少量TLR4mRNA表达，手术刺激后8h(2．79j=0．57)、ld(4．51：E0。54)、2d(1．66+0．31)TLR4mRNA表达明显上调，与术前相比有统计学差异(P0．05)。3切口痛大鼠脊髓水平IL．I[3mRNA的变化IL-113mRNA手术刺激后2h(2．33