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1、Toll样受体4及转录因子【摘要】目的检测胎盘组织中Toll样受体4(toll-likereceptor4,TLR4)及转录因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)的表达,探讨其与妊娠期高血压疾病发病的关系。方法用免疫组化法对40例妊娠期高血压疾病患者(试验组)(妊娠期高血压10例、子痫前期30例)、20例正常妊娠孕妇(对照组)胎盘组织中TLR4及NF-κB进行检测。结果子痫前期(preeclampsia,PE)患者胎盘中的TLR4及NF-κB表达明显高于正常妊娠组(P0.05)。结论
2、胎盘组织中的TLR4及NF-κB表达升高与妊娠期高血压疾病的发病有关。【关键词】Toll样受体4;转录因子-κB;妊娠期高血压疾病AbstractObjectiveTodetectToll-likereceptor4andNF-κBintheplacentainordertoevaluatetherelationshipofToll-likereceptor4andNF-κBalpregnanten(thecontrolgroup)and40hypertensivepregnanten(thestudygrou
3、p)，encluding10patientspsiaplacentamunohistochemistry.ResultsTheToll-likereceptor4andNF-κBexpressionlevelsinPEgroupalpregnantgroup(P0.05).ConclusionTheelevatedexpressionofToll-likereceptor4andNF-κBintheplacentamayplayanimportantroleinPE.Key×1.0cm×1.0cm大小、无钙化的
4、胎盘组织。用生理盐水冲掉血液,然后置于4%的多聚甲醛中固定24h,低温石蜡包埋,4μm连续切片,进行免疫组织化学染色(SABC法)。1.3试剂TLR4及NF-κB免疫组化染色试剂盒及DAB染色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司,具体操作方法严格按说明书进行。1.4结果判定TLR4及NF-κB以镜下在细胞胞浆出现棕黄色颗粒,用乳腺癌阳性片做阳性对照，PBS液代替一抗做阴性对照。由两个观察者对切片进行盲式阅片,显微镜下随机选择5个视野,观察所选择的高倍镜视野中的所有滋养细胞,记录阳性染色细胞百分数(%)并计分。
5、阴性：小于5%的胎盘细胞呈阳性或无着色,计0分;弱阳性：5%～10%的胎盘细胞呈阳性,计1分;阳性：11%～50%胎盘细胞呈阳性,计2分;强阳性：大于50%的胎盘细胞呈阳性,计3分。细胞着色强度则以阳性细胞呈现的染色(棕黄色)计分：强着色：着色和已知阳性片同样强度,计3分;浅着色：着色浅,但与阴性对照片有明显区别者，计1分;染色强度在浅着色和强着色之间者为中等着色,计2分;将阳性百分数计分和细胞染色计分相加为免疫组化积分。1.5统计学分析实验数据以均数±标准差表示,分析所有数据输入计算机,用SPSS11.0统计
6、学软件进行处理。对数据进行正态性检验和方差齐性分析后。临床资料采用t检验P0.05表示差异有显著性。2结果2.1TLR4及NF-κB在各组胎盘组织中的表达在正常妊娠组及妊娠期高血压疾病组的胎盘组织中均有一定表达.freellund等4对正常足月妊娠胎盘免疫组化研究,证明其中有TLR4的表达。Abrahams等5提出TLRs在介导母胎之间天然免疫中起重要作用。2005年Kim等6用免疫组化法研究了胎盘中的TLR4的结果相似，这一结果证实了TLR4与PE关系密切。本研究采用免疫组化法检测妊娠期高血压疾病患者和正常妊
7、娠晚期妇女胎盘组织中TLR4及NF-κB蛋白表达情况,结果提示TLR4及NF-κB在PE胎盘组织合体滋养细胞中表达与正常胎盘组织相比明显升高，且随疾病的进展，表达渐增高，而妊娠期高血压患者比较虽有增高，但无统计学意义。这一结果证实了TLR4与PE的关系，可见作为引发PE的关键部位,胎盘组织中TLR4表达的变化可能PE发生的关键环节之一，并影响疾病的发展。从这一结果推测可能存在某些内源性因素刺激胎盘组织TLR4，进而激活NF-κB,引发TNF-α、IL-6的释放,表明PE时胎盘组织中TLR4表达与IL-6、TNF
8、-α分泌之间可能存在相关性,但激活TLR4的这些内源性因素及TLR4和炎性细胞因子之间的相关性有待深入研究。综上所述,PE患者胎盘中TLR4及NF-κB表达增加可能是PE发病机制中的关键环节之一,寻找TLR4的内源性配体是探讨子痫间前期发病机制的重要内容之一,为我们进一步探讨天然免疫对PE的影响提出新课题。【
