微生物的实验室培养用课件

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1、课题1微生物的实验室培养专题2微生物的培养与应用1.提供营养和条件2.防止污染一.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源(1)pH值如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性(2)特殊营养物质----维生素、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素(3)氧气的含量如:培养厌

2、氧微生物时需要提供无氧的条件2.培养基内所需的其他条件生长因子3.种类：固体培养基液体培养基有无凝固剂琼脂物理性质：菌落单个或少数菌体特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。功能：定义：菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体形态各异的菌落其它分类：根据化学成分分合成培养基——成分明确天然培养基——成分不明确根据用途分选择培养基鉴别培养基选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基分离导入了目的基因的受体细胞牛肉膏蛋白胨培养基

3、是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g分析营养构成？练习1（多项选择）1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是A光合细菌B根瘤菌C硝化细菌D乳酸菌2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是A糖、有机酸等B二氧化碳、碳酸盐C蛋白质D无机氮化物3、下列叙述不正确的是A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同C微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌A.CA.CB.C.1.无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手

4、、衣着消毒实验用具、培养基灭菌实验操作过程酒精灯旁操作超净工作台二.无菌技术：防止外来杂菌的污染耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min二.无菌技术：防止外来杂菌的污染2.消毒与灭菌：思考:1)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生

5、物污染外，还有什么目的？2)消毒和灭菌有何不同？3)为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?4)请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。①培养细菌用的培养基与培养皿②玻棒、试管、烧瓶和吸管③实验操作者的双手消毒灭菌条件温和强烈作用范围物体表面或内部一部分,不包括芽孢和孢子物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。灭菌灭菌消毒营养成分不被破坏培养基培养皿空气接种环双手牛奶②巴氏消毒③化学消毒⑤紫外线消毒⑥高压蒸气灭菌①灼烧灭菌④干热灭菌常用的消毒方法和灭菌方法1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5

6、g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g三.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落冷却至50℃，在酒精灯火焰附近倒平板?思考1溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?答:②加琼脂的目的是什么?答:可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中,减少误差作为凝固剂思考2在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基

7、的锥形瓶的目的是什么？答:②培养皿能否用高压蒸汽灭菌？答:?在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞,在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌.讨论:(1).培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？(2).为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？(3).平板冷凝后，为什么要将平板倒置？(4).在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？