2.1《微生物的实验室培养》+课件+

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1、课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养条件：（1）合适的营养和环境条件（2）确保其他微生物无法混入一.培养基1.概念：按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。按成分不同划分天然培养基合成培养基化学成分不恒定的天然有机物牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基。用于工业生产化学成分完全了解的物质配制而成的培养基高氏1号培养基、查氏培养基。用于分类和鉴定分类按物理状态不同划分固体培养基液体培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%琼脂含量一般为0.2%-0.7%不加任何凝固剂半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分

2、离、鉴定、活菌计数及菌种保藏观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究按用途不同划分基础培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基用于鉴别不同类型微生物的培养基选择培养基微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长【例】以下是单克隆抗体制备流程示意图：根据培养基的________分

3、类，图中HAT培养基属于________培养基选择用途3.培养基的成分：思考：各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）+满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求C营养物质功能主要来源碳源能为微生物的代谢提供碳元素的物质无机碳源：二氧化碳、碳酸氢钠有机碳源：糖类、蛋白质、脂肪、石油等氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质无机氮源：氮气、氨气、NO3-、NH4+生长因子生长必不可少的微量有机物维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高外界摄入无机盐为微生物提供碳源、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素无机化

4、合物C二.无菌技术思考：1.什么是无菌技术？包括哪些方面？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防止杂菌污染的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒：使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌：使用强烈的理化因素，杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）的过程。4、紫外线消毒……(1)消毒的方法：4.常用的消毒与灭菌的方法1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-7

5、5℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用70%-75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源牛奶饮水、食物和餐具等物体表面和空气接种室、接种箱或超净工作台3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。接种工具，接种环、接种针或其他金属用具玻璃器皿（吸管、培养皿）培养基、玻璃器皿（试管、锥形瓶、吸管、培养皿）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂（70%酒精等）紫外线针对不耐高温的液体接种室、超净工作台能耐高温的，需要保持干燥的物品灼烧法干热灭菌高压蒸汽灭菌接种工具（接

6、种环等）吸管实验操作者的双手培养皿等玻璃器皿培养基1、消毒方法2、灭菌方法干热灭菌三.实验操作---大肠杆菌的纯化培养（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算－称量－溶化－灭菌－倒平板（冷却至50℃）（二）纯化大肠杆菌最常用的接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法接种环接种针4．灭菌:将培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。倒平板技术12342.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。3.用左手的拇指和食指将培养皿打开一

7、条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。4.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：可以用手触摸盛有培养基