慢性低o2高co2对小鼠脑组织mptp及细胞凋亡的影响

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1、温州医学院硕士学位论文慢性低O2高CO2对小鼠脑组织MPTP及细胞凋亡的影响姓名：邵蒙蒙申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：王小同2012-05-23温少I'1医学院硕士学位论文慢性低O：高CO：对小鼠脑组织MPTP及细胞凋亡的影响中文摘要目的1．观察慢性低02高C02对小鼠脑皮层、海马区CytC、AIF表达的影响，从线粒体角度，探讨慢性低02高C02诱导神经细胞凋亡的可能机制。2．探讨线粒体通透性转换孔(MPTP)在慢性低02高C02诱导的神经细胞凋亡中的作用及其机制，并为临床上进行药物干预提供可能的治疗靶点。方

2、法第一部分慢性低02高C02对小鼠脑皮层、海马区CytC与AIF表达的影响1．参考文献【11，制作动物模型：SPF级雄性C57／BL6小鼠，随机分为对照组(NC)、慢性低02高C02组(删)，NC组于常温常压条件下饲养，HH组置于02浓度9％～11％和C02浓度5％～6％的舱内饲养，每天8h，每周6d，持续4周，其余时间饲养条件与NC组相同；2．HE染色观察小鼠脑组织病理学变化；3．免疫组化检测两组小鼠皮层、海马区CytC与AIF的表达水平；第二部分慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体通透性转化孔的影响1．模型制备：同第

3、一部分；2．小鼠脑组织线粒体分离制备：颈椎脱臼法处死小鼠后，迅速于冰上取脑，去除小脑和脑干，留下皮层和海马部分，采用差速离心法进行分离线粒体，制成线粒体悬液，以上所有操作均在4。C冰浴上进行，经詹纳斯绿染色及电镜证实线粒体结构及观察其形态变化，BCA法进行线粒体蛋白定量，以BSA为标准。3．检测MPTP开放情况；4．荧光分光光度计检测脑线粒体膜电位变化；5．ELLSA法检测线粒体内的CytC、AIF；温州医学院硕士学位论文结果第一部分慢性低02高C02对小鼠脑皮层、海马区CytC与AIF表达的影响1、HE染色观察小鼠脑组

4、织病理学变化：NC组：细胞排列整齐，细胞间质均匀，神经细胞结构正常，未见神经细胞变性坏死等明显病理变化。HH组：神经细胞结构模糊，胞体发生肿胀、间质出现水肿，以及不同程度的核质深染、细胞皱缩。2、小鼠脑皮层和海马区qjCytC与AIF的免疫组化结果：与NC组比较，HH组在皮层、海马区q]CytC表达的平均光密度IOD／Area值均有显著差异(P<0．05)。与NC组相比较，AIF表达在皮层区有显著差异(PO．05)。第二部分慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体通透性转化孔的影

5、响1、小鼠脑组织提取线粒体鉴定：提取的脑组织线粒体经1％詹纳斯绿B染色液后，光镜下观察到蓝绿色颗粒状或哑铃状；电镜下观察提取的脑组织线粒体纯度较高，NC组线粒体结构基本完整，可见双层膜结构，线粒体嵴排列整齐，HIt组的线粒体结构破坏，出现明显的肿胀，空泡变性，线粒体脊膜破裂，脊突溶解。2、慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体MPTP的影响通过检测线粒体的膨胀性变化来分析和观察MPTP开放状态。在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中，MPTP的诱导开放，显著改变线粒体的通透性。我们实验发现，HH组其吸光值

6、比值(A540／InitialA540)明显降低，有统计学意义(P

7、加小鼠脑皮层、海马区CytC与AIF表达，提示神经细胞凋亡可能与线粒体损伤有关。温州医学院硕士学位论文2．在慢性低02高C02条件下，小鼠脑组织中线粒体通透性转化孔开放增多，线粒体膜电位△、王，(m)下降，线粒体存在不可逆性损害。3．慢性低02高C02可引起脑组织线粒体功能损害，导致神经细胞凋亡，其机制可能与MPTP的开放密切相关。关键词：低氧；高二氧化碳血症；线粒体通透性转化孔；线粒体膜电位；细胞色素C；凋亡；温州医学院硕士学位论文TheDisfunctionofMitochondrialPermeabilityTra

8、nsitionPoreandtheApoptosisinMiceBrainIducedbyChronicHypoxiaHypercapniaAbstractobjective1．ToinvestigatetheexpressionsofCytCandAIFincerebralcortexandthehippocamp