慢性低o2高co2对大鼠海马bcl

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1、慢性低O2高CO2对大鼠海马Bcl【摘要】目的:探讨慢性低O2高CO2对大鼠海马神经细胞凋亡的诱发作用及对Bcl-2、Bax基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠50只，随机均分成5组：正常对照组（NC）、低O2高CO21周组（1HH）、2周组（2HH）、3周组（3HH）和4周组（4HH）。采用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡；以RT-PCR检测海马Bcl-2mRNA和BaxmRNA的表达。结果:随着低O2高CO2时间延长，凋亡指数(AI)及BaxmRNA水平进行性升高；Bcl-2mRNA先升高后下降（均P<0.01）。AI与BaxmRNA之间呈显著正相关（r=0.814，P<

2、;0.01），而与Bcl-2mRNA/BaxmRNA比值之间呈显著负相关（r=-0.405，P<0.01）。结论:慢性低O2高CO2可以诱发大鼠海马神经细胞凋亡，Bcl-2/Bax比值下降是促进凋亡的重要因素。【关键词】海马低氧高碳酸血症凋亡Bcl-2BaxAbstract:Objective:Toexploretheinducingeffectofchronichypoxichypercapniaontheapoptosisofratneuralcellsinthehippocampus,andtherelationshipbetalespragu-dalydividedin

3、tofivegroups:normalcontrolgroup(NC),hypoxichypercapnia1-pusRNAinthehippocampusinedRNARNARNA(r=0.814,P<0.01),andthereRNA/BaxmRNA(r=-0.405,P<0.01).Conclusion:Apoptosiscanbeinducedbychronichypoxichypercapniainrathippocampus.TheratioofBcl-2/Baxdeclineacceleratestheoccurrenceofapoptosis.Keypus

4、;hypoxia;hypercapnia;apoptosis;Bcl-2;Bax临床上慢性阻塞性肺疾病（chronicobstruc-tivepulmonarydisease，COPD）由于通气功能障碍常引起低氧血症或伴高碳酸血症，病情持续发展可导致肺性脑病。动物实验也发现，慢性低氧能够引起脑组织结构和功能的损害[1，2]，但迄今为止，其发生机制尚未完全阐明。近年来研究发现，细胞凋亡可能在慢性低氧性脑损害中起重要作用[3]。本实验采用慢性低O2高CO2性肺动脉高压大鼠模型，通过不同低O2高CO2干预时间（1周、2周、3周、4周），动态观察大鼠海马神经细胞凋亡及凋亡相关基因表达的变化，

5、初步探讨慢性低O2高CO2大鼠海马神经细胞凋亡的可能机制。1材料和方法1.1主要材料常压低02高CO2舱（温州医学院肺心病研究室研制），CYESIl型O2、CO2气体测定仪（上海市嘉定学联仪表厂生产），Medlab生物信号采集处理系统（南京美易科技有限公司生产），TUNEL试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司生产），梯度PCR仪（Effendorf公司生产），RT-PCR试剂盒（Fermentas公司提供）。1.2动物分组及模型制备[4]雄性SD大鼠50只（温州医学院实验动物中心提供），体重180～220g。随机分成5组：即正常对照组（NC）、低O2高CO21周组（1HH）、2周组（2

6、HH）、3周组（3HH）和4周组（4HH），每组10只。将后4组动物放入常压低O2高CO2舱内，舱内充入氮气（N2）使O2浓度维持在9%～11%，CO2浓度维持在5.5%～6.5%，每天8h，连续1周（1HH组）、2周（2HH组）、3周（3HH组）或4周（4HH组）。对照组大鼠除吸入空气外，其他饲养条件与各低O2高CO2组相同。动物饲养到规定时间后，用戊巴比妥钠（35mg/kg）腹腔麻醉，右心导管法测定平均肺动脉压（mPAP）、平均颈动脉压（mCAP）。1.3取材和标本制作经左颈总动脉插管处用4℃生理盐水200m1灌注10min。将大鼠断头，取脑置于冰盘上，快速分离出左、右海马。左侧

7、海马置于液氮迅速冷冻，再放-70℃冰箱保存，用于RT-PCR检测。右侧海马放入4%多聚甲醛中固定4h，依次进行梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋、5μm厚连续切片，用于细胞凋亡检测。1.4海马神经细胞凋亡原位检测采用原位缺口末端标记（TUNEL）法，按试剂盒提供方法操作。镜检细胞核中有棕黄色颗粒者为凋亡细胞。随机计算5个高倍视野（×400）下的凋亡细胞数。凋亡指数（apoptosisindex，AI）以凋亡细胞/100个细胞（%）表示。1.5Bcl-2和