慢性低O2高CO2对小鼠神经元凋亡及硝基酪氨酸表达的影响.doc

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1、慢性低O2高CO2对小鼠神经元凋亡及硝基酪氨酸表达的影响【摘要】目的:探讨慢性低O2高CO2对小鼠皮层及海马神经细胞凋亡及硝基酪氨酸表达的影响。方法:雄性C57BL/6小鼠24只，随机分为对照组、低O2高CO22w组和低O2高CO24w组，采用原位末端标记法检测皮层和海马区神经细胞凋亡并计算凋亡指数（AI），免疫组织化学染色检测皮层和海马区细胞硝基酪氨酸的表达。结果:慢性低O2高CO22w组和4w组小鼠皮层和海马AI及硝基酪氨酸表达均明显高于对照组，两者呈正相关。结论:慢性低O2高CO2可以诱发小鼠皮层和海马神经元凋亡，可能与其促进硝基酪氨酸表达有关。【关键词】低氧高碳

2、酸血症小鼠神经元凋亡硝基酪氨酸Abstract:Objective:Toexploretheeffectsofchronichypoxichypercapniaontheapoptosisofmouseneuralcellsandtheexpressionofnitrotyrosineinthecortexandhippocampus.Methods:TwentyfourmaleC57BL/6micewererandomlydividedintothreegroups:normalcontrol,hypoxichypercapnia2w,hypoxichypercapn

3、ia4w.Theapoptosisindexes(AI)ofneuralcellsincortex/hippocampuswereachievedbyterminaldeoxynuleotidyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)andtheexpressionofnitrotyrosineinthecortex/hippocampuswasdetectedbyimmunohistochemistry.Results:BoththeAIandtheexpressionofnitrotyrosineofneural

4、cellsincortexandhippocampusinhypoxiahypercapniagroupswerehigherthanthoseinnormalcontrolgroup.CorrelativeanalysisshowedthattherewasapositivecorrelationbetweenAIandtheexpressonofnitrotyrosine.Conclusion:Chronichypoxichypercapniacaninduceneuralcellsapoptosisinmousecortexandhippocampus,which

5、maybeassociatedwithitseffectsonexpressionofnitrotyrosine.Keywords:hypoxia；chronic；hypercapnia；mouse；neurons；apoptosis；nitrotyrosine动物实验发现，慢性缺氧能够引起脑组织结构和功能的损害，可能与多种因素有关,如谷氨酸过量释放、细胞内钙离子超载、自由基产生等。但确切的机制尚未阐明。低氧导致的NO产生和清除之间的平衡破坏，加重自由基对细胞的损害可能是造成神经细胞损伤、凋亡的重要因素[1]。本实验通过建立慢性低氧高二氧化碳小鼠模型，观察不同阶段的神经

6、细胞的凋亡，检测NO/ONOO-代谢产物硝基酪氨酸（Nitrotyrosine，NT）的表达，探讨慢性低氧高二氧化碳诱导神经细胞凋亡的可能机制。1材料和方法41.1材料SPF级雄性C57BL/6小鼠由温州医学院实验动物中心提供，TUNEL试剂盒由武汉博士德公司提供，兔抗小鼠硝基酪氨酸抗体由美国Chemicon公司提供，DAB染色试剂盒、抗兔生物素化二抗、HRP标记链亲和素由上海晶美生物工程有限公司提供。1.2方法1.2.1实验分组：SPF级雄性C57BL/6小鼠24只，体重23～27g，随机分为对照组（C组）、低O2高CO22w组（2HH组）及低O2高CO24w组（4H

7、H组），每组8只。1.2.2模型建立：将小鼠置于常压低氧高二氧化碳动物饲养舱内[2]，维持舱内氧浓度在9%～11%，二氧化碳浓度为5%～6%，温度为22～26℃范围。2HH组在氧舱内2w，4HH组在氧舱内4w，每天8h，每周6d。为了使动物能适应，每次氧浓度从21%降至10%的时间控制在15～20min，二氧化碳浓度升高至5%的时间控制在30min。对照组小鼠吸入空气，其他条件与模型组相同。动物饲养到各相应时间点后，颈椎脱臼法处死取右侧皮层和海马，固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。1.2.3检测指标：采用原位末端标记法检测皮层和海马区细