99tcm-egfr mrna反义肽核酸的制备及其在荷lewis肺癌c57bl6小鼠模型中的显像研究

《99tcm-egfr mrna反义肽核酸的制备及其在荷lewis肺癌c57bl6小鼠模型中的显像研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文99Tcm--EGFRmRNA反义肽核酸的制备及其在荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠模型中的显像研究姓名：任秀春申请学位级别：硕士专业：影像医学与核医学指导教师：赵新明201203中文摘要99Tem．EGFRmRNA反义肽核酸的制备及其在荷Lewis肺癌C57BL／6小鼠模型中的显像研究摘要目的：研究99TCm标记表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)mRNA反义肽核酸(peptidenucleicacid，PNA)的制备方法，评价其标记条件及体外稳定性，并探讨该分子探针在荷Lewis肺癌

2、C57BL／6小鼠体内显像的价值，研究反义基因显像早期、特异性诊断恶性肿瘤的可行性，为核素基因反义显像分子探针的制备及其早期诊断肿瘤提供实验依据。方法：以EGFRmRNA第251-267位寡核苷酸片段即57．AGCAGCGATGCGACCCT．3’为靶序列，利用化学合成法人工合成EGFRmRNA反义PNA5’．AGGGTCGCATCGCTGCT．3’及无义PNA5’．AGTAGAGATGTGACGAT．3’。于反义／无义PNA5’端连接4个氨基酸(Gly．(D)．Ala．Gly．Gly．)的短肽结构，形成一个类似N4结构的强螯合基团，并引入1个丫．氨基丁酸(4．a

3、minobutyricacid，Aba)作为隔离物消除空间阻碍，形成结构为Gly．(D)AIa．Gly．Gly．Aba．57．AGGGTCGCATCGCTGCP3’的化合物，利用配体交换法对反义PNA进行99Tcm标记。以相同的方法标记无义PNA，利用高效液相色谱法(hi曲performanceliquidchromatography,HPLC)及快速薄层层析法(instantthin．1ayerchromatography,ITLC)测定标记物的即刻标记率，同时将标记物室温下放置4h、8h、12h以及24h后测定其体外稳定性；并将两种分子探针分别与人新鲜血清混合

4、后37℃条件下静置24h，然后测定其在血清中的稳定性。复苏小鼠肺癌(Lewis)瘤株，接种于一只小鼠的右侧腋窝皮下，待移植肿瘤生长直径达2．0cm左右，处死荷瘤小鼠，将肿瘤组织切割成(3．4)mm3大小的组织块，制备成单细胞悬液，注射于小鼠右侧腋窝皮下，每只小鼠注射0．2ml，约4×106个细胞。定期观察小鼠的生存状态、饮食及肿瘤生长状况，当移植瘤体直径约1cm时，选取肿瘤形态规则，色泽红润，大小无显著性差异的荷瘤小鼠用于试验。利用逆转录．聚合酶链反应(ReverseTranscriptasePolymeraseChainReaction，RT-PCR)检测Lew

5、is肺癌中文摘要肿瘤组织中EGFRmRNA的表达情况。取10只荷瘤小鼠，随机平均分为反义显像组和无义显像组，分别经尾静脉注射标记率较高的99Tcm-EGFRmRNA反义／无义PNAO．1ml(含37MBq)，于注射后2h、6h、12h以及18h上机显像，观察两组间荷瘤小鼠移植瘤放射性浓聚的差异。采用SPSS16．0统计学软件对实验数据进行分析，所有计量资料结果均以x士S表示，两组间计量资料行独立样本f检验，多组间计量资料采用单因素方差分析，以p<0．05表示差异有统计学意义。结果：①经HPLC分析，在理想的标记条件下，99Tcm-EGFRmRNA反义PNA呈单峰，

6、保留时间约为3．1min。经ITLC检测，标记物的即刻标记率可达(95．64±2．48)％(n=5)，室温下静置8h后标记率大于90％；标记物与新鲜血清孵育24h后标记率均仍>82％。99TCm-EGFRmRNA反义PNA即刻标记率高，无需纯化，稳定性较好，可直接用于动物体内显像实验；@RT-PCR结果显示：在相应的位置可看到清晰的特异性条带，说明Lewis肺癌肿瘤组织高表达EGFRmRNA；③注射反义探针后2h移植瘤显影，肿瘤／对侧肢体放射性比值，即靶与非靶比值(targettonontargetratios，咖比值)随时间推移而增加，12h以后两组T／NT比值

7、(反义组12h：6．05±0．18，18h：7．06±0．18；无义组12h：1．29±0．12，18h：1．02±0．05)差异均有统计学意义(12h：f=53．392，P<0．05；18h：户76．657，P<0．05)，其中18h时肿瘤显像最清晰。在显像早期，无义探针在移植瘤内有轻度浓聚，在6h以后肿瘤的浓聚程度下降，差异有统计学意义(P

8、瘤体内，对