99tcm标记egfr mrna反义肽核酸荷瘤卵巢癌基因显像的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：壬娜导师签章二级学院领导盖章：年月Et河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标

2、注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：壬姆P聊签一年月日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7研究论文99Tcm标记EGFRmRNA反义肽核酸荷瘤卵巢癌基因显像的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与

3、方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15宝日才<⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1)附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．30结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述肿瘤基因反义显像的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4

4、l致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55中文摘要99Tcm标记EGFRmRNA反义肽核酸荷瘤卵巢癌基因显像的研究摘要目的：研究99Tcm标记表皮生长因子受体(Epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)mRNA反义肽核酸(peptidenucleicacid，PNA)行EGFR基因分子探针的制备，测定其标记率及放化纯，评价其在体内外的稳定性，并探讨其在EGFRmRNA表达阳性卵巢癌荷瘤裸鼠体内分布及体内显

5、像的情况，以探索核素基因显像在活体内评价肿瘤基因表达状况，为肿瘤早期特异诊断和靶向治疗及疗效评价提供新的分子影像学方法。方法：针对EGFRmRNA(genbank序列号：NIX4201283．1)的第503．519碱基序列(17bp)，设计反义PNA57．AATGAGGACATAACCAG．3及无义PNA5"-AGTAGAGATGTGACGAT-3’，将4个氨基酸(Gly．(D)．Ala-Gly．Gly)连接在其57端，此四个氨基酸可形成一个类似N4结构的强螯合基团，在PNA与四个氨基酸之间再引入一个隔离物丫．氨基

6、丁酸(4．amino．butyricacid，Aba)以消除空间障碍，然后用核素99Tcm进行标记。用高效液相色谱法(hi．ghperformanceliquidchromatography,HPLC)测定两种探针的标记率及放化纯，并分别测定其在室温下静置、与生理盐水及人新鲜血清l：1混合置于37℃水浴箱中1、2、4、6、12、24h的放化纯以分析其在体外的稳定性；收集了注射99Tcm-EGFRmRNA反义及无义PNA探针荷瘤裸鼠30min及2．3h尿液，用HPLC测定其标记率以了解其在荷瘤裸鼠体内的稳定性。采用静

7、置贴壁法培养人卵巢癌SKOV3细胞，收集对数生长期的人卵巢癌SKOV3细胞，调配成浓度为3x106个／ml加入到六孔板中，6x105个细胞／每孔(2009L／孔)，然后置于培养箱中进行培养。待细胞长满至整个孔的80％。90％后，换新鲜培养基，然后加入30uL(37kBq)稀释好的反义或无义PNA溶液，再置于培养箱中分别培养l、2、4、6、12、24h后收集其上清及沉淀，测定其放射性计数，计算不同时间的摄取率并比较有无差异。将稀释好的30此99Tcm-EGFRmRNA反义或无义PNA(37kBq)加入到SKOV3细胞

8、的每个培养孔内(6x105个／孔)，分别在培养箱内培养6h后，迅速移去培养基并换成新鲜培养基，再置于中文摘要培养箱中继续培养至1、2、4、6、12、24小时收集每孔的上清及沉淀，并测定其放射性计数。计算不同时刻的细胞滞留率，初步探讨两种探针在人卵巢癌SKOV3细胞中的药代动力学。采用逆转录．聚合酶链反应(ReverseTranscriptasePolymer