99tcm直接法标记angiostatin及其在荷瘤小鼠体内研究

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1、99Tcm直接法标记Angiostatin及其在荷瘤小鼠体内研究　　【Abstract】AIM:Toobservethedistributionofdirectlabelledangiostatin(AS)by99Tcmintumorbearingmiceandtoevaluatethevalueof99TcmASinpositiveimagingoftumor.METHODS:AngiostatininedbyTLC.Thebioactivityof99TcmASanumbilicalveinepithelialcel

2、lline(CEV304).Blockingexperimentakesurethatthebinationoftumorand99TcmASorbearingBALB/cmiceinistrationof99TcmAS.99TcmASASinvivoagingade.RESULTS:Thelabelingefficiency(>95%)of99TcmASeasthatofnonlabeledAS.Itsdistributionintumorbearingmiceindicatedthattheuptakeof99

3、TcmASincreasedgradually2-12hafter99TcmASinjectionandthepositiveimageoftumorAS.CONCLUSION:99TcmAScangatherintumorsinmiceandthisspecificbindingmayberelatedtothereceptorsofAS.99TcmASprobablycanbeusedinpredictingtheeffectsofantiangiogenesistherapyintumortreatment.　　【

4、Key;Isotopelabeling;distributioninvivo;imaging　　【摘要】目的：99Tcm直接法标记血管抑素（angiostatin,AS），观察其在荷瘤小鼠体内的生物分布并进行显像，以探讨其在监测肿瘤对抗血管生成治疗的应答中的价值.方法：氯化亚锡还原法进行AS的99Tcm标记，纸层析法测标记率；用人脐静脉内皮细胞系（ECV304）观察其生物活性；为了明确99TcmAS与肿瘤的结合，是否存在受体特异性，我们进行了封闭实验.在给药前2h用未标记AS预处理荷乳腺癌EMT6瘤株的BALB/c小鼠，

5、尾静脉注射99TcmAS，观察其体内分布并进行显像.结果：氯化亚锡还原法标记AS可获得较高的标记率(>95%)，其抑制内皮细胞生长的生物活性与AS相似.在荷瘤小鼠体内分布结果显示：肿瘤的摄取率随着时间延长而增加，在注射99TcmAS后2~12h，肿瘤可清晰显像，同时，用未标记AS预先封闭肿瘤可使肿瘤对99TcmAS摄取率下降.结论：99TcmAS在荷瘤小鼠体内可浓聚于肿瘤，肿瘤对显像剂的摄取存在一定的特异性；99TcmAS有可能在肿瘤抗血管生成治疗疗效评价中发挥作用.　　【关键词】血管抑素;锝;同位素标记;体内分布

6、;显像　　0引言　　恶性肿瘤的生长具有血管生成依赖性，原发肿瘤的生长、浸润和转移均需要新生血管［1］.自从1994年O’Reilly等［2］发现血管抑素（Angiostatin,AS）以来，由于它的强大的抗血管生成和抗肿瘤转移作用，而受到了人们的关注.现已证明它是血纤维蛋白溶酶原的裂解片段，其Mr约为38×103，在血管内皮细胞表面有其特异受体［3］.本研究探讨了99Tcm直接法标记AS的方法，并对99TcmAS在荷瘤小鼠体内的分布及显像进行了初步研究.　　1材料和方法　　1．1材料　　试剂与仪器:AS由第四军医大学生物

7、化学教研室提供［4］，99TcmO4-由钼锝发生器（中国原子能科学研究院同位素所）淋洗而来；MDP药盒为江苏省原子医学研究所产品；MINIScan(美国Bioscan公司)，XH6010放免γ计数仪（国营262厂）；人脐静脉内皮细胞系（ECV304）购于上海细胞生物学研究所；BALB/c小鼠由第四军医大学实验动物中心提供；EMT6乳腺癌细胞系由日本引进，在第四军医大学动物中心保存；单光子发射计算机断层（SPECT）为法国SOPHY公司产品.　　1．2方法　　1．2．199TcmAS的合成采用SnCl2还原法［5］：①含1

8、00μgAS的反应瓶中加入0.1mol/L,pH9.0的硼酸缓冲液1mL，再加入新鲜淋洗的99TcmO4-185MBq；②在MDP药盒中加入用1mol/L盐酸溶液配制而成的浓度为20g/L的SnCl2溶液25μL，以去氧水(去离子水在60℃水浴中30min)稀释至1mL；③取②液10μL加入①反应瓶中，充入氮气至压力