visfatin在高糖环境下新生大鼠心脏细胞中的表达调节

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1、河北医科大学博士学位论文Visfatin在高糖环境下新生大鼠心脏细胞中的表达调节姓名：杨蓉申请学位级别：博士专业：内科学指导教师：李拥军201204中文摘要Visfatin在高糖环境下新生大鼠心脏细胞中的表达调节摘要高血糖是糖尿病主要标志及病理生理学基础。糖尿病心肌病是糖尿病心血管并发症之一，糖尿病心肌病患者心肌损伤主要来源于心肌细胞及心肌间质细胞两方面，过去人们对于心肌细胞损伤的研究较多，近年来越来越多的研究发现心肌间质的纤维化在糖尿病心肌病发生、发展中也起着不可忽视的作用。心肌间质重构及纤维化是糖尿病心肌病的特征性

2、病理表现。现代研究表明，内脏脂肪组织作为最重要的内分泌器官，其分泌的多种细胞因子如C．反应蛋白(C．reactiveprotein，CRP)、肿瘤坏死因子．a(tumornecrosisfactor-a，TNF．0【)、白介素．6(interleukin．6，IL．6)和脂联素、抵抗素及瘦素等与动脉粥样硬化、冠心病、高血压及糖尿病等肥胖相关性疾病病变程度密切相关。Visfatin是2005年新发现的一种脂肪细胞因子，因其最初是在内脏脂肪细胞发现的，故命名为内脂素，随后的研究发现Visfatin与前p细胞克隆增强因子(p

3、re．pcellcolony．enhancingfactor，PBEF)基因的5’非编码区序列相同。而且与烟酰胺腺嘌吟二核苷酸(NAD)合成的限速酶，即尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NamP)结构也相同。Visfatin不仅在人类脂肪组织、白细胞表达，还在人和动物肝细胞、肌肉组织及肾脏中表达，并发挥不同的生物活性效应。可影响心血管疾病、内皮功能障碍、胰岛素抵抗、糖尿病等发生发展的进程。Visfatin具有类胰岛素效应，还能促进脂肪细胞分化、抑制细胞凋亡，促进细胞成熟、增殖，促炎等。有研究发现，Visfatin作为生长刺激因子

4、，其可能像脂连素、瘦素一样，可由心脏本身生成，并反馈作用于心脏，发挥类胰岛素效应、炎症因子、促增殖、抗凋亡等作用。但目前关于心脏细胞表达visfatin的研究极少，糖尿病心肌病作为糖尿病心血管主要并发症之一，迄今国内外尚未见高糖环境中心脏细胞表达、合成的visfatin相关研究报道。本研究以高浓度葡萄糖作用于新生Sprague．Dawley(SD)大鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞，探讨visfatin在高糖作用下的乳鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞中的表达情况，并对其表达调节及对心肌纤维化的相关影响中文摘要进行了初步探讨。为临床

5、治疗糖尿病，降低糖尿病的心肌损害，提供重要的理论依据和指导，为糖尿病心肌病提供新的治疗靶点。第一部分MAPK信号转导通路对高糖诱导下新生大鼠心肌细胞中Visfatin表达的调节目的：离体条件下应用不同浓度，不同时间葡萄糖干预新生SD大鼠心肌细胞，观察Visfatin表达情况，探讨不同MAPK信号转导通路对高糖刺激下Visfatin表达的调节作用口方法：提取、培养新生SD大鼠心肌细胞，(1)不同浓度葡萄糖干预，检测心肌细胞visfatin表达：设对照组葡萄糖5．5mmol／L：高糖10mmol／L组；高糖30mmol／L

6、组；高糖50mmol／L组；高渗对照组(5．5mmol／L葡萄糖+44．5mmol／L甘露醇)。(2)同一浓度葡萄糖在不同时间干预，检测心肌细胞visfatin表达：设对照组葡萄糖5．5mmol／L；高糖30mmol／L6h束1]激组；12h刺激组；24h束lJ激组；48h束1]激组。(3)不同信号转导通路抑制剂干预，检测心肌细胞visfatin表达变化：设对照组(葡萄糖5．5mmol／L)；高糖30mmol／L组：高糖30mmol／L+ERK1／2抑制剂(PD98059)组；高糖30mmol／L+JNK抑制剂(SP6

7、00125)组；高糖30mmol／L+P38MAPK抑制剂(SB203580)组。应用MTT法检测心肌细胞活性；RT．PCR法测定心肌细胞visfatin．mRNA表达；Westernblot检澳,lJvisfatin蛋白质的表达。结果：1不同浓度葡萄糖对于心肌细胞Visfatin．mRNA／protein表达的影响：(1)从MTT结果示：以不同浓度(5．5mmol／L，10mmol／L，30mmol／L，50mmol／L)葡萄糖刺激48小时，随葡萄糖浓度的增加，吸光度值呈剂量依赖性增加，50mmol／L时达峰，10、

8、30、50mmol／L各组与对照组相比，P<0．01均有显著统计学差异。(2)在不同浓度(10mmol／L，30mmol／L，50mmol／L)葡萄糖刺激下，除高渗组外，10mmol／L，30mmol／L，50mmol／L各组与5．5mmol／L对照组相比，visfatin．mRNA表达均增加，P<0．01有显著统计学差异。10m