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1、低氧条件下大鼠视网膜葡萄糖调节蛋白的表达【摘要】目的研究低氧条件下葡萄糖调节蛋白(grp78)在大鼠视网膜中的表达情况,探讨内质网应激在视网膜低氧条件下的作用及其机制。方法ethodsThirtylydividedintonormalcontrolgroupandexperimentalgroup.Theratsintheexperimentalgroupoved.Theexpressionofgrp78munohistochemicallyandbyusingreversetranscriptasePCR(RTPCR).ResultsExpressionofgrp78alre
2、tina,butincreasedafter6hoursofhypoxia,reacheditspeakafter24hoursofhypoxiaandfellbacktothenormallevelafter72hours.Thedifferencesinexpressionsofgrp78intheratsafterhypoxiabreedingfor6,12,24and48hoursechanismofretinalhypoxicinjury.［KEY2MLV逆转录酶、rTaq酶(Takara公司),引物设计合成由大连宝生物公司完成。 1.2低氧模型的建立及实验分组用有机
3、玻璃（厚度4cm）制成低氧仓，体积为100cm×60cm×60cm，三氯甲烷封侧面，仓体上面开一直径1cm的出气孔，侧面开一直径1cm的进气孔，通过三通管分别接氮气和压缩空气。用玻璃转子流量计（沈阳市北量流量仪器厂）控制流量。S1.5[3]统计分析软件进行数据处理,结果以±s表示,数据间比较采用单因素方差分析及SNKq检验。 2结果 2.1各组视网膜中grp78表达的比较对照组大鼠视网膜组织grp78弱阳性表达,主要分布于视网膜节细胞层和内核层。低氧条件6hgrp78的表达开始升高,仍表达在视网膜节细胞层和内核层，与对照组相比差异有显著性(q=5.32,P<0.05)
4、;12h即可见grp78表达明显增多(q=9.37,P<0.01);grp78的表达高峰出现在24h(q=15.14,P<0.01);48hgrp78表达开始下降,但仍高于正常对照组(q=11.53,P<0.01)；72h组grp78的表达与正常对照组相比，差异无统计学意义(q=2.80,P>0.05)。见表1。 2.2RTPCR检测grp78mRNA与内参照GAPDHmRNA的扩增产物片段长度分别为445、265bp，与预期相符。内参照基因扩增产物均明显可见，各组视网膜组织grp78mRNA的RTPCR产物电泳结果见图1。半定量分析的结果显示,对照
5、组大鼠视网膜组织中grp78mRNA有少量表达。低氧12h即可见grp78mRNA表达明显增多（F=183.61，q=7.83,P<0.01）；grp78mRNA的表达高峰出现在24h(q=32.33,P<0.01）；48hgrp78mRNA表达开始下降，但仍高于对照组(q=23.48,P<0.01）；72hgrp78mRNA的表达与正常对照组相比，差异无统计学意义(q=0.34,P>0.05）。见表1。表1各组视网膜中grp78及grp78mRNA表达的比较（略） 3讨论视网膜是高度分化的神经组织，中枢神经系统对低氧最敏感，在人体的感官系统中，视网膜
6、的代谢非常旺盛，主要由有氧代谢提供能量，对低氧的耐受性最低，机体内血氧的浓度及其弥散入组织的水平对维持视网膜组织的正常生理功能起着重要的作用。大量的研究表明，低氧对视网膜的神经元损伤，尤其是神经节细胞的损伤明显[4]。早在1988年,DAVID发现处于低氧环境中的鸡胚胎视网膜内核层、内网状层及神经节细胞层受损。低氧24h可导致视网膜所有类型的细胞数明显下降[5]。有研究表明，低氧导致的视网膜神经节细胞损伤与内质网应激反应的发生有关。内质网应激反应是细胞的一种自我保护性机制,以恢复内质网稳态,维持生存。但是过强或长时间的内质网应激反应可以引起细胞凋亡。一些损伤因素如低氧、葡萄糖或氨
7、基酸等营养物质不足,肽链在内质网中折叠受阻,内质网中分泌蛋白超负荷、病毒感染、基因突变、内质网与胞质间钙离子浓度差失调等都可成为内质网应激的重要诱因[6]。细胞为了生存产生针对内质网应激的反应,称为内质网应激反应。grp78又名免疫球蛋白重链结合蛋白(bip)，被认为是内质网应激反应的标志性分子，其生理状态下表达很低，主要功能是作为分子伴侣参与新生多肽链的折叠、装配和转运；在缺血、低氧、低糖、氧化应激、钙离子失衡等不利环境应激下引起内质网应激反应，导致大量多肽链在内质网内变性、积
