基质金属蛋白酶组织抵制剂-1对髓核细胞影响的初步研究

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1、隶劫大·粤硕士学位论文基质金属蛋白酶组织抑制剂．1对髓核细胞影响的初步研究ThePreUminaryStudyofEffectsofTissueInhibitorofMatrixMetalloproteinase一10nNucleusPulp。susceus—ADisse化monSubmittedtoFormeMasterDegreeofMedicineBYW砸gChengSupervisedbySUperylSedbyProfessorHu距gM缸gSchoolofmedicineSoutlle嬲tUniversityJune2012东

2、南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：j虹日东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的

3、内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：乏主支导师签名：刍迭日期：拿山山。妒研究生签名：士孟X导师签名：各殴日期：j山山。妒中文摘要基质金属蛋白酶组织抑制剂．1对麓核细胞影响的初步研究东南大学临床医学院骨科学专业研究生：王成导师：黄明目的：体外培养人髓核细胞，使用不同浓度的基质金属蛋白酶组织抑制剂．1对髓核细胞进行干预，观察不同浓度的基质金属蛋白酶组织抑制剂．1干预下的体外髓核细胞生物学活性的影响，初步探讨Tm口．1对

4、椎间盘退变缓解或逆转的作用。方法：体外培养人髓核细胞10例，每例细胞传代后共分6组，以不同浓度的基质金属蛋白酶组织抑制剂．1分别对传代后的髓核细胞进行干预，其中A组为对照组(即Tm心．1浓度为0n酌n1)，另5组加入Tm伊-1进行干预，浓度分别为(1，10，20，40，80n咖1)，即B组、C组、D组、E组、F组。分别于干预后第2，4，6，8d采用WESTEI矾BI，orrr玳G技术测定各组II型胶原的定量表达。并于第6d对髓核细胞行甲苯胺蓝染色检测髓核细胞中蛋白聚糖的表达，第8d对髓核细胞行细胞免疫荧光染色法测定各组髓核细胞Ⅱ型胶原的表

5、达。结果：(1)甲苯胺蓝染色显示：细胞胞浆呈天蓝色，系细胞内蛋白聚糖被甲苯胺蓝深染，越靠近细胞核染色越深。随Tmm．1浓度的增加，染色结果亦逐渐加深。于40Il咖11组染色最深。(2)细胞免疫荧光染色显示：染色后于倒置荧光显微镜下显示髓核细胞呈淡绿色或绿色荧光，荧光主要分布于细胞胞浆，而细胞核部分几乎无荧光显示。随着Tm但．1浓度上升，荧光强度逐渐增强(P<0．05)，且Tm口．1浓度为40Il咖d(E组)时荧光强度达到最大值；F(80n酌【n1)组与E组相比荧光强度明显减弱。中文摘要(3)WES删BI．d盯ING显示：随着Tm心．1作用

6、时间的延长II型胶原的表达量逐渐上升(p<0．001)。且随着TIⅦP．1浓度上升，II型胶原的含量也逐渐增加(P<0．001)，TIMP．1浓度为40Il咖l(E组)时II型胶原的含量达到最大值；F(8011西【111)组与E组相比II型胶原的含量明显减少。结论：(1)Tm但．1干预后，髓核细胞中II型胶原和蛋白聚糖的表达量明显上升，提示其可有效缓解或逆转椎间盘髓核细胞的退变。(2)随着Tm伊．1作用浓度的上升，髓核细胞中II型胶原的蛋白表达量也逐渐上升。当Tm口-1的浓度在40n咖ll时，II型胶原和蛋白聚糖的表达量达到峰值；1’m但

7、．1浓度在80n咖l时，II型胶原和蛋白聚糖的表达量不升反降，提示咖．1的最佳作用浓度应该在4酬左右；过量的Tm但．1可能存在细胞毒作用。关键词：椎间盘退变；髓核细胞；细胞培养；基质金属蛋白酶；基质金属蛋白酶组织抑制剂．1ⅣAbst阳ctThepreHminarystlldyofe仃ectsofTissueinhibitorofma触metaUopro蛐ase-1onnucleuspulposusceUsD印artrnentofom帕paedicsu略cy’MedicalCollegeofS伽【me鹤tUniverSi坝N趾jiIl&21

8、o009，ChiIlaPo啦乒adllate：WangChengSupervisor：H1姗gMiIlgAbstractOM优tives：T0s缸“atemeh啪锄deg锄锄廿Venucleu