p2x3受体胞内相互作用分子的筛选、鉴定及其功能研究

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1、’—●军医天罾硕士学位论文P2X3受体胞内相互作用分子的筛选、鉴定及其功能研究IdentificationandFunctionalStudyofP2X3ReceptorIntracellularInteractingMolecules研究生姓名：王春燕指导教师：何成教授第二军医大学学科、专业：神经生物学学位类型：科学学位二。一三年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律

2、责任。学位论文作者签名：刁看阮日期：为f弓年』角；日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：啊希魂日期：弦f多年占月≥日导师签名：t争／=乏≥^√日期：矽侈年乡月弓日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5—1‘·—L日¨百⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。10二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。15三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一22四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。30五、结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43在读期间发表论文和参加科研工作情况说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59P2x3受体胞内相互作用分子的筛选、鉴定及其功能研究摘要P2x3受体属于配体门控的离子通道，其N端和C端在细胞内，有两个跨膜结构域和一个大的胞外环。P2X3受体受细胞外ATP激活，能够非选择性地通透钠离子、钾离子、钙离子等低价阳离子。P2X

5、3受体主要表达在皮肤、关节、空腔脏器等组织或器官的初级传入神经元．介导痛觉传导、味觉传导、胃肠蠕动、膀胱反射等多个生理过程，因此对P2X3受体调节的研究具有非常重要的意义。目前针对P2X3受体的相关工作主要集中在以其细胞外调节为核心的药理学性质方面的研究，也有不少工作揭示了P2X3受体与细胞膜上其他分子的相互作用，然而对于其在细胞内的调节和相互作用，仍知之甚少。本研究通过酵母双杂交实验，以P2X3受体C端胞内域为诱饵蛋白，从人胚脑cDNA文库中筛得6个新的与P2X3受体有潜在相互作用的分子，其中之一为肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(HGS)。HGS分子最初于1995年被克隆出来

6、。其分子量大小为llSKDa，含有数个功能性结构域，锚定于胞内体膜上，参与细胞内信号转导、泛素依赖的蛋白降解与膜蛋白再循环等过程。HGS分子在哺乳动物脑内有高水平蛋白表达，并参与调节钙离子依赖的突触小泡的胞吐过程。但对于它在DRG中的表达与功能目前尚无报道。我们以HGS为对象，进行了进一步的鉴定和功能研究。我们的工作在酵母双杂交的基础上，通过免疫共沉淀实验证实，HGS分子可以与P2X3受体发生结合。而免疫组化实验表明HGS分子与P2玛受体在大鼠DRG神经元中有良好的共定位。在共转HGS分子和P2X3受体的HEK293T细胞中，HGS分子对a，13-甲基-ATP诱导的P2X3受体电流

7、有抑制作用。以上结果提示，HGS有可能在DRG神经元中，通过与P2X3受体发生相互作用，对P2X3受体的功能产生抑制，从而参与痛觉传导、味觉传导、胃肠蠕动、膀胱反射等功能的调节。关键词：酵母双杂交，P2X3受体，HGS分子，背根神经节第二军医大学硕士学位论文．2．P2X3受体胞内相互作用分子的筛选、鉴定及其功能研究AbstractP2X3receptorsbelongtotheligand-gatedionchannels，withintracellularcytop