loc401296分子相互作用蛋白的筛选和鉴定

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1、中图分类号：Q291论文编号：HBLG2015-007UDC：密级：公开硕士学位论文LOC401296分子相互作用蛋白的筛选和鉴定作者姓名：王远学科名称：病原生物学研究方向：分子细胞生物学学习单位：华北理工大学学习时间:2年提交日期:2015年5月10日申请学位类别：理学硕士导师姓名：陈晶副教授单位：华北理工大学基础医学院王治东副教授单位：北京军事医学科学院论文评阅人：袁丽杰教授单位：华北理工大学基础医学院朱丽华副教授单位：华北理工大学基础医学院论文答辩日期：2015年5月30日答辩委员会主席：汤华教授关键词：LOC401296；酵母双杂

2、交技术；相互作用蛋白；唐山华北理工大学2015年6月ScreeningandIdentificationofInteractionProteinswithLOC401296DissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyWangYuan(PathogenicOrganisms)ProfessorChenJingSupervi

3、sor:PhD.WangZhidongJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：2015年06月07日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位

4、论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：2015年06月07日签字日期：2015年06月07日摘要摘要目的采用酵母双杂交系统，寻找与LOC401296存在相互作用的蛋白，通过对相互作用蛋白的分析，以进一步了解LOC401296的功能。方法1采用酵母双杂交的方法筛选LOC401296的相互作用蛋白。首先构建pDBLeu-loc融合表达载

5、体，再将pDBLeu-loc转入MaV203酵母菌株，并进行毒性和自激活检测；然后筛选成人肝cDNA文库，进行阳性克隆三报告基因表型鉴定；最后阳性克隆回转验证，排除假阳性克隆。生物信息学分析筛选到的阳性克隆。2采用细胞免疫荧光方法联合激光共聚焦技术观察LOC401296与相互作用蛋白在HEK293细胞中的共定位。结果1通过酵母双杂交技术筛选出了LOC401296相互作用蛋白。成功构建pDBLeu-loc融合表达载体，并对筛选到的阳性克隆回转验证。将得到的阳性基因进行生物信息学分析共得到8个阳性克隆。2成功构建pEGFP-GRN、pEGFP

6、-PLSCR1、pEGFP-N4BP2L2三个融合表达载体。采用细胞免疫荧光方法联合激光共聚焦技术观察LOC401296分别与GRN、PLSCR1、N4BP2L2在HEK293细胞中共定位情况，发现LOC401296与3个相互作用蛋白均存在共定位。结论1通过酵母双杂交技术筛选LOC401296的相互作用蛋白，共筛选出8个阳性克隆，分别为GRN、PLSCR1、N4BP2L2、FN1、NOTCH3、LTBP3、ADAMTS-L4、EGFL7，这些基因各具功能，这表明了LOC401296参与的生物学过程的多样性及其作用机制的复杂性。2通过细胞免

7、疫荧光方法联合激光共聚焦技术对LOC401296和GRN、PLSCR1、N4BP2L2进行了细胞内定位研究，观察到LOC401296与GRN、PLSCR1、N4BP2L2在HEK293细胞内的表达以及良好的共定位情况，为后续研究LOC401296的功能提供了线索。图26幅；表4个；参95篇。关键词：LOC401296；酵母双杂交技术；相互作用蛋白分类号：Q291-I-华北理工大学硕士学位论文AbstractObjectivesByyeasttwohybridscreenouttheinteractingproteinofLOC401296

8、molecules,andthroughwhichtostudythefunctionofLOC401296molecules.Methods1Screeningtheinteractionp