筛选并鉴定果蝇jumeau相互作用的蛋白质

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1、万方数据学校代码：10225学号：S14554学位论文筛选并鉴定果蝇Jumeau相互作用的蛋白质指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：张晴金丽华教授硕士2014年4月东北林业大学学科专业：遗传学论文答辩日期：2014年6月授予学位日期：答辩委员会主席：论文评阅人：春a-,c4t,匕q,万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S14554＼㈣Y2㈣723㈣24籼4DissertationfortheDegreeofMasterScreeningandidentificationofproteinsinteract

2、ingwithDrosophilaJumeauCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：University：ZhangQingProf．JinLihuaMasterGeneticsJune，2014NortheastForestry万方数据摘要果蝇作为一种典型的模式生物，在昆虫和人类的天然免疫研究中一直占有重要的地位。现今，许多关于天然免疫的研究结果都是从对果蝇的研究中发现的。果蝇Schneider2(s2

3、)细胞株来自黑腹果蝇培养末期的胚胎，其许多特征显示与果蝇巨噬细胞类似。果蝇S2细胞的培养简单、高效，且同时具有哺乳动物表达系统和昆虫表达系统二者的优良特征，是一个高效率的表达系统。Jumeau(Jumu)蛋白是果蝇体内的一个重要的转录因子，编码719个氨基酸，是首个被发现的具有双重功能的FKH／WH家族蛋白，能引起异染色质的大规模修饰。但是目前Jumu蛋白在果蝇天然免疫中的作用及转录调控机制还不十分明确。本实验以L．Giot及KCtGuruharsha等人的研究结果一果蝇Jumu蛋白与Cos、CG5375及L(1)SC之间存在潜在的蛋白相互作用一为基础。通过构建

4、以GFP蛋白为标签的重组质粒，制备高效率的GFP多克降抗体，利用果蝇S2细胞系蛋白表达系统，蛋白免疫共沉淀技术来验证Cos、CG5375及L(1)sc与Jumu的相互作用。结果显示，果蝇Jumll蛋白与Cos、CG5375及L(1)sc蛋白之间不存在相互作用。为此，我们通过转染空载体pMK33一Flag作为阴性对照和pMK33．Flag-Jumufulllength重组质粒到果蝇S2细胞中并筛选稳定的细胞表达体系，利用蛋白免疫共沉淀技术结合双向电泳实验筛选与Jurau蛋白相互作用的蛋白。通过相关软件对双向电泳凝胶图像分析，共筛选出7个差异蛋白，其相对分予量分别为

5、141KDa，82KDa，69KDa，44KDa，38KDa，27KDa和26KDa。根据以上筛选结果，我们对这些差异样品点进行抠点处理并消化，迸行质谱分析。最终得到这些差异点的具体氨基酸序列，进行数据库检索得到其所属蛋白为Act5C，Hsc70—3，Rpn6，betaTub56D和CGl0306。因而，接下来我们将会通过免疫共沉淀技术对这些相互作用进行验证。关键词Jumu蛋白：蛋白质免疫共沉淀；蛋白相互作用；果蝇S2细胞；双向电泳万方数据AbstractDrosophilamelanogaster,asatypicalmodelorganism，playsan

6、importantroleininnateimmunitystudiesofinsectsandhumans．Nowadays，manyfindingsabouttheinnateimmunityareIYomtheresearchofDrosophila．DrosophilaSchneider2(s2)Cellswasderivedfromaprimarycultureoflatestage(20—24hoursold)Drosophilamelanogasterembryos，manyfeaturesoftheS2celllinesuggestthatiti

7、sderivedfromamacrophage．1ikelineage．S2celllinethatcultureissimpleandefficient，whilehavingexcellentcharacteristicsbothofinsectexpressionsystemandmammalianexpressionsystem，isahighlyefficientexpressionsystem．Jumeau(Jumu)proteinisanimportanttranscriptionfactorinDrosophila，containing719am

8、inoacids．Jum