crf r1受体阻断剂对幼年大鼠快眼动睡眠及脑内ach的影响

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1、郑州大学硕士学位论文CRFR1受体阻断剂对幼年大鼠快眼动睡眠及脑内ACh的影响姓名：刘学东申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：冯平福;张朝20070501郑州大学2007年硕士研究生毕业论文中文摘要CRFRI受体阻断剂对幼年大鼠快眼动睡眠及脑内ACh含量的影响研究生刘学东导师冯平福张朝郑州大学医学院河南郑州450052摘要引言：睡眠分为快眼动睡眠(rapideyemovementsleep,REMS)和非快眼动睡眠(nonREMS)。而REMS和NREMS在睡眠周期中所占的比例在新生期和成年期也有着很大的区别。新生期睡眠是以REMS在发育早期(初生期)最

2、多，随着发育成熟而逐渐减少为主要特征的。虽然在成年人和动物，胆碱能神经元被认为是主要的REM睡眠的调节神经元，已有实验证实脑桥网状结构及脚桥被盖核胆碱能神经元在REMS的触发和维持中起着关键作用，然而，胆碱能神经元对于幼年期REM睡眠的作用仍有待进一步的研究。这是因为新生大鼠脑内的胆碱能递质浓度是非常低的，随着发育成熟而逐渐升高，这与REMS的变化趋势恰好相反。现有研究表明，促肾上腺皮质激素释放因子(cortieotropin-releasingfactor，CRF)的脑内含量与REMS在发育过程中的变化呈平行关系，而且在人类抑郁症患者也发现有脑脊液CRF水平、

3、血AcnI水平和皮质醇水平的升高嘲。有可靠证据提示此类患者多数有REMS增多的倾向。而且给睡眠剥夺72小时的大鼠侧脑室注射CRF后可显著增加ITEMS反跳。CRF拮抗剂可以阻断睡眠剥夺导致的REMS反跳。上述现象促使我们提出这样的假郑州大学2007年硕士研究生毕业论文中文摘要设：CRF可能是促发幼年期高比例REM睡眠的重要因素之一。据此，我们提出这样的问题：使用CRFR1受体阻断剂后，是否会导致发育期大鼠快眼动睡眠减少?目的：本研究拟用多导睡眠描记结合使用免疫荧光测量法，观察对幼年(新生)大鼠注射CRFR1受体拮抗剂NBl27914后，其睡眠傥醒周期的变化，并检

4、测阻断剂注射后动物不同脑区组织内乙酰胆碱(ACh)的含量，探讨CRF在幼年大鼠REMS发生和维持中的作用，分析其可能机制。方法：本实验分两部分第一部分选用出生后13天的幼年大鼠，在乙醚麻醉下行脑电(electroencephalogram，EEG)和颈部肌电(elcctromyogram，EMG)电极安装术．手术恢复12小时后开始连续12小时的EEG和EMG描记，采集的EEG和EMG信号经过模／数及数／模转换输入计算机显示并记录，在记录的第6小时分别给予腹腔注射三个剂量的NBl27914(12．5mg／kg、25mg／kg和50mg／kg)、阿托品(6mg／kg

5、)和等量生理盐水。第二部分出生后14天幼年大鼠，注射25mg／kg的NBl27914后1小时断头处死，取其额叶皮质、顶叶皮质、丘脑、下丘脑、脑桥、中脑。使用荧光ELISSA方法分别进行荧光免疫分析，测定组织内ACh的含量。使用SPSS(11．0版本)软件进行统计处理，睡眠／觉醒记录资料和免疫荧光定量数据以均数加减标准误(牙-+SE)表示。资料处理使用单因素方差分析(onewayANVOA)及F-检验或t-test检验。P

6、示随着NBI浓度的增加，相对应的实验组REMS相应减少。与给药前6小时相比，给药后6小时平均总REMS在NBll2．5mg／kg组减少35．57％，在NBl25mg／kg组减少48％，在NBl50mg／kg组减少53％。给药前后及给药后与对照组相比，差异均有显著性(P<0．05)。在ITEMS减少的同时，觉醒在NBI50mg／kg组、NBI25mg／kg和NBI12．5mg／kg组有所增加，分别增加约为7．78％、7．98％(PO．05)。NREMS在Nm50mg／kg组、NBI25mg／kg和NBll2．5m班g组均有增加，分别Ⅱ

7、郑州大学2007年硕士研究生毕业论文中文摘要为11．37％、10．23％和8．92％(P<0．01)。2．考虑胆碱能系统对睡眠觉醒周期的作用，我们使用阿托品--Ml受体阻断剂，观察其对幼鼠睡眠的影响。在幼年大鼠腹腔注射阿托品(6mg／kg)后，与对照组相比，REMS减少约49．00％。差异有显著性僻<0．01)。REMS的减少主要伴随着觉醒的增加(37％，p<0．01)而不是NREMS的增加(18％，p>0．05)．给药前后及给药后与对照组相比差异均有显著性(只(0．∞5)。3．与对照组相比，注射NBl27914后，丘脑和中脑组织内ACh含量分别减少了6．58％

8、和10．54％。单因素方