cdc25a抑制rig-i介导的信号通路机制研究

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2、人授权可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：枷磊签字日期：加I弋年r月汀日学位论文作者毕业去向：工作单位：通讯地址：剔磁各I巾听签字日期：妒c叶年f月vS"Ft电话：邮编：摘要Cdc25A抑制RIG-I介导的信号通路机制研究

3、lIIIIfrillIIIIIIIIIIIIIIIHIIIIIIIfY2577951RIG．I介导的天然免疫反应是宿主抗病毒的重要防御机制。模式识别受体(PI汛)RI

4、G．1分布在细胞质中，当病毒感染宿主细胞之后，RIG．I通过其C末端特异性地识别并结合病毒的病原相关分子模式(PANIP)，主要是带有5’-pPP的RNA(包括ssRNA和dsRNA)和短的dsRNA，导致其自身发生ATP依赖的构象改变，释放出N端的CARDs结构域。活化的RIG．I和定位于线粒体外膜上的VISA通过CARD结构域之间的相互作用结合在一起，激活VISA，活化的VISA继续招募下游的信号蛋白，如TRAF3／6、TRADD、TANK蛋白等，在线粒体上形成一个以VISA为中心的信号复合体，磷酸化激活TB

5、Kl和IKK，最终导致NF一1cB和IRF3／7的活化入核并结合到IFNp基因的调节区，调节IFNp的转录表达。RIG．I介导的信号通路在宿主的天然免疫反应中的重要地位，要求宿主细胞必须能够对RIG．I信号通路进行严密的调控，以免造成细胞自身的损伤。目前对RIG．I信号通路调控的研究主要集中在2个方面：①宿主细胞蛋白对RIG．I信号通路的调控，包括正调控和负调控。TRIM25蛋白是一种E3泛素连接酶，能够特异的和RIG．I的CARD区相互作用，介导RIG．I的CARD区的Lysl72发生Lys63连接的泛素化，促

6、进砒G—I与VISA的结合，正调控RIG—I信号通路。但另外一种E3泛素连接酶RNFl25则能够介导RIG．I的N端部分发生Lys48连接的泛素化，导致RIG．I的泛素化降解，负调节RIG．I信号通路。此外，负调控RIG．I信号通路的细胞蛋白还有DUBA、CYLD、SIKE、SHPl等。②病毒蛋白对RIG．I信号通路的调控。如A型流感病毒编码的非结构蛋白NSl，它可以特异性的结合RIG．I，抑制其功能。丙型肝炎病毒HCV的NS3／4A具有蛋白酶活性，能够特异的从Cys508位氨基酸残基切断VISA，使VISA从线

7、粒体上脱离，从而失去信号转导的能力。大量的研究表明，在RIG．I信号通路的调控中，蛋白的磷酸化修饰发挥着非常重要的作用，例如我们实验室最近发现的蛋白激酶CKlyl通过磷酸化p65的Cdc25A抑制RIG—I介导的天然免疫信号通路机制研究Ser536，使其发生CUL2和COMMDl介导的泛素化降解，从而抑制RIG—I信号通路；IKK复合体磷酸化Ir,_B，使Ir,．B发生泛素化降解，活化NF-KB入核，启动IFNB基因转录；活化的TBKl磷酸化转录因子IRF3／7，形成IRF3／7同源或异源二聚体，入核，促进IFN

8、D基因转录。但是，目前关于RIG．I信号通路蛋白去磷酸化调控的研究还不是很深入。通过前期的荧光素酶报告基因筛选，我们发现磷酸酶Cdc25A能抑制RIG．I信号通路。Cdc25A是一个双特异性的磷酸酶。已有的研究表明，Cdc25A与细胞周期的调控、细胞增殖、肿瘤发生和预后不良等密切相关，但Cdc25A对天然免疫调控的研究目前还没有文献报道。我们的研究表明，过表达Cdc25A显著的抑制了仙台病毒SeV和A型流感病毒RNA诱导的IFND启动子的激活。荧光素酶报告基因分析发现Cdc25A能够抑制RIG．I、VISA和TB

9、Kl等蛋白诱导的IFNp启动子的激活，但却不影响IRF3诱导的ISRE启动子的激活和p65诱导的NF．r,B启动子的激活，这也就暗示Cdc25A可能是作用于TBKl水平负调控RIG．I信号通路，进一步的研究发现，Cdc25A能够抑制TBKl和IIⅫ3的磷酸化，表明Cdc25A对RIG．I信号通路的调控可能与其磷酸酶活性有关。免疫共沉淀实验证明Cdc25A可以结合RIG．I