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时间:2019-02-24
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1、分类号学校代码!Q5垒2密级学号2Q!!Q21垒!三Q5KCTD1抑制经典Wnt信号通路的机制研究MechanismResearchofKCTD1inSup-·pressesingCanonicalWntSignalingPathway指导教师姓名、职称工尘:凰型塾蕉湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一四年五月摘要经典Wnt信号通路调控正常胚胎发育、细胞增殖和生长,它的异常激活会导致人类肿瘤的发生。p连环蛋白(13.catenin)是Wnt信号通路的关键调控因子,然而调控13-catenin蛋白稳定性的分子机制尚不完全清楚。我们近期的研究表明钾离子通道蛋白四聚体1(K
2、CTDl)强烈抑制TCF/LEF的转录活性。通过CO.IP和GSTpull--down实验证实KCTDl蛋白和13-catenin蛋白在体内、体外存在相互作用,并且我们确定了两蛋白相互作用的区域,即13-catenin的1-9armadillo重复基序和KCTDl的BTB结构域,特别是Ala.30和His.33位点。免疫荧光分析表明KCTDl促进13-catenin蛋白在细胞质内的积累。蛋白稳定性分析证实KCTDl在HeLa细胞内促进13-catenin蛋白泛素化降解,而蛋白酶体抑制剂MGl32可以抑制KCTDl介导的13-catenin蛋白降解。进一步的研究发现KCT
3、D1介导的13-catenin降解依赖于酪蛋白激酶1(CKl)和糖原合酶激酶3p(GSK.313)的磷酸化作用,并且降解作用能被E3泛素化连接酶p.转导重复相容蛋白(13-TrCP)增强。此外,KCTDl能抑制Wm下游基因和转录因子AP.20【的表达。最后,我们发现Wnt信号通路成员APC和肿瘤抑制因子p53影响着KCTDl下调13-catenin。这些结果充分表明KCTDl是一个新的经典Wnt信号通路抑制因子。关键词:KCTDl;经典Wnt信号通路;fl-cateninABSTRACTThecanonicalWntsignalingpathwaycontrolsnor
4、malembryonicdevelopment,cellularproliferationandgrowth,anditsaberrantactivityresultsinhumancarcinogenesis.Thecorecomponentinregulationofthispathwayis13-catenin,butmolecularregulationmechanismsofD-cateninstabilityarenotcompletelyknown.Here,ourrecentstudieshaveshownthatKCTD1stronglyinhibit
5、sTCF/LEFreporteractivity.Moreover,KCTD1interactedwith13-cateninboth/nvivobyCO—immunoprecipitationaswellas/nvitrothroughGSTpull--downassays.Wefurthermappedtheinteractionregionstothe1-9armadillorepeatsof13-cateninandtheBTBdomainofKCTD1,especiallyPositionAla一30andHis一33.Immunofluorescencean
6、alysisindicatedthatKCTD1promotesthecytoplasmicaccumulationof13-catenin.Furthermore,proteinstabilityassaysrevealedthatKCTD1enhancestheubiquitination/degradationof13-catenininaconcentration-dependentmannerinHeLacells.Andthedegradationof[3-cateninmediatedbyKCTD1wasalleviatedbytheproteasomei
7、nhibitor,MG132.Inaddition,KCTD1-mediated13-catenindegradationwasdependentondependentoncaseinkinase1(CKl)andglycogensynthasekinase一3p(GSK-313)-mediatedphosphorylationandenhancedbytheE3ubiquitinligase13-transducinrepeat-containingprotein(p—TrCP).Moreover,KCTD1suppressedthee
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