cask对exendin-4诱导的ins-1细胞胰岛素分泌的影响及机制研究

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1、隶劫大·粤硕士学位论文万方数据CASK对Exendin．4诱导的INS．1细胞胰岛素分泌的影响及机制研究本论文获江苏省自然科学基金资助项目(BK2012752)资助。万方数据ThlechanismofCASK。，olvedemechnolinvolvedi—nlnExendin一4一inducedinsulinsecretioninINS．1cellsAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedica

2、lScienceBYZhuZheng—qiuSupervisedbyAssociateProfessorⅥ7=fⅢGYaoSchoolofMedicineSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所

3、做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：皋五』酲日期：东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。日万方数据中文摘要CASK对Exendin．4诱导的INS．1细胞胰岛素分泌的影响

4、及机制研究东南大学医学院研究生朱正球导师王尧摘要目的：胰岛B细胞分泌功能障碍是糖尿病主要发病机制之一。研究发现，胰高血糖素样肽．1(Glueagon．1ikepeptide一1，GLP．1)及其长效类似物艾塞那肽(Exendin-4，Ex-4)在改善p细胞分泌功能障碍方面有显著的效应，但其确切机制目前仍不清楚。钙／钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium／calmodulin-dependentserineproteinkinase，CASK)，以往被认为是一种细胞骨架蛋白，但近年来研究发现

5、，CASK在神经元中参与了细胞内外信号传导、核内基因转录表达及突触后膜兴奋性等多种生理学过程，尤其是在神经递质囊泡分泌方面，CASK发挥了重要的调控作用。前期的研究发现，CASK在胰岛p细胞中呈高表达，但目前功能尚不明。本研究拟利用体外培养的大鼠胰岛B细胞系INS．1，初步探讨CASK是否参与了Ex一4诱导的INS．1细胞胰岛素释放过程及可能的参与机制。方法：1．体外培养大鼠INS．1细胞，利用定量PCR、Westernblot及免疫荧光检测INS一1细胞内CASK的mRNA、蛋白水平及胞内定位

6、情况。2．利用RNA干扰技术抑制CASK的表达。3．通过葡萄糖刺激胰岛素释放试验(GSIS)来检测INS一1细胞分泌功能，并用放射免疫法测定胰岛素含量。结果：1．CASK在大鼠胰岛13细胞系INS．1、小鼠胰岛13细胞系MIN6及大鼠原代胰岛中均有丰富的表达；CASK在INS．1中主要定位于细胞质。2．干扰CASK后，可明显抑制浓度梯度下EX4诱导的胰岛素分泌(P<0．01)。3．浓度梯度下EX_4可明显促进CASKmRNA及蛋白水平的表达(氏O．01)，但对其在核内及核外的定位无明显影响。4．

7、PKA阻滞剂H-89可部分阻断Ex4促CASK表达作用(P<0．01)，而Epac2激动剂ESCA．AM并不能改变Ex一4对CASK的促表达作用(胗0．05)。结论：1．CASK参与了Ex-4诱导的胰岛素分泌过程。2．Ex4可促进CASK的表达，万方数据东南大学硕士学位论文从而正向调控胰岛素分泌过程。3．Ex．4部分通过cAMP／PKA信号通路调控CASK的表达，从而最终影响胰岛素的分泌过程。分泌关键词：钙／钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶；胰高血糖素样肽一1；INS．1；胰岛素II万方数据目录Th

8、mechanismofCASK。volvedemecnanKinvolvedi。nlnExendin．4inducedinsulinereticin4qnauceainSUlinsecretionINS．1一l州S—lcellsSchoolofMedicine,SoutheastUniversityPostgraduateZhuZhengqiuMentorsWangYaoAbstractObjective：Exendin-4(Ex-4)isallanti—diabeticdrugthatisap