胰岛素对胰岛β细胞的影响及其机制研究

《胰岛素对胰岛β细胞的影响及其机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海交通大学医学院2．005级博士学位论文胰岛素对胰岛细胞的影响及其机制研究摘要：近年来的研究发现大多数2型糖尿病患者在发病初期已出现胰岛素，的早期相分泌缺陷；反映其岛p细胞功能已出现障碍，若及时治疗则能够部分或完全地恢复其胰岛功能。另有研究者发现胰岛素具有自分泌作用，且胰岛p细胞本身也可发生胰岛素抵抗，但具体机制尚不清楚。因，●此，本研究旨在观察胰岛素对胰岛细胞的作用，结合基因和蛋白质表达。分析，讨论其中可能的机制，并探索促进胰岛细胞生存和恢复正常功能●，的途径。本研究观察了胰岛素对大鼠原代胰岛细胞(拥有完整的胰岛结构)和小鼠MIN6胰岛p细胞株(单一的细胞类型)的作用，进而

2、在培养环境中添加胰岛素抗体，以中和胰岛素的效应，并进一步采用荧光实时定量PCR●和Western蛋白印迹方法，从基因和蛋白表达层面分析了胰岛素对胰岛细胞的作用机制。结果发现，外源性胰岛素(0．1nmol／L和100nmol／L)对大鼠原代胰岛细胞和小鼠MIN6胰岛p细胞株的葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)功能没有明显影响，与单纯高浓度葡萄糖培养无差异(P>0．05)；添加胰岛素抗体(0．125～2pg／m1)后，则表现胰岛素分泌量降低(测定C’．：肽，P

3、剂量一效应、时间一效应关系，而加入相同浓度的无关抗●体后，胰岛素的分泌量与对照组没有差异(P>O．05)。形态学观察也发现，经胰岛素抗体干预的胰岛细胞，较早出现胰岛结构的破坏和胰岛细胞的死亡，因体外培养的环境中并不存在体液免疫和细胞免疫的完整体系，也排除了抗体免疫球蛋白的非特异作用，推测其影响可能由胰岛素抗体中和了环境中的胰岛素所致。通过噻唑蓝(MTT)的细胞活力分析也发现，小、●●。●鼠MIN6胰岛p细胞株在胰岛素抗体干预后，活力较快下降a：作为对照的相同浓度无关抗体对大鼠原代胰岛或小鼠MIN6胰岛p细胞株均无类似效应。基因和蛋白质表达研究显示，胰岛素或胰岛素抗体对于胰岛细胞

4、的-‘胰岛素及其调控因子PDX一1的表达影响均不显著，胰岛素使Bcl-2的表一●●‘．达略有升高，而胰岛素抗体贝lJI下调Bcl-2的表达，并上调Bad和Bax的。L表达。提示胰岛素对胰岛细胞的分泌功能影响不大，但能够提高细胞的、●生存活力，而胰岛素抗体可能通过中和胰岛素的作用，促进胰岛p细胞的凋亡。关键词糖尿病，胰岛：胰岛素，胰岛素抗体，基因表达，蛋白质表达上海交通大学医学院2005级博士学位论文EFFECTSOFINSULINONISLET13．CELLSANDITSMECHANISMAbstractFromtherecentstudies，mostofthetype2di

5、abeticpatientshadearly·phaseinsulinsecretiondeficiencywhenthediagnosisestablished．Thedeficiencywascausedofimpiredislet13-cellfunction，whichcouldberecoverpartiallyortotally，withappropriatetreatment．Ifwasalso．．foundthatinsulincouldaffectisletcellsiIlanautocrineway,andonthecontrary,islet13-cell

6、scouldresistanttoinsulinliketheothertissues．But,therelationshipbetweentheinsulinandtheisletremainsunclear．刀jeaimofthisstudyistoexploretheinsulineffectsontheisletcellsandtheexpressionofrelatedgenes，inordertorevealtheirrelationshipandfindoutthewayimprovingtheislets’function．Inthepresentstudy,p

7、rimaryratisletcellsandmiceMIN6IB-cellswereculturedwithexogenicinsulin(O．1and100nmol／L)andinsulinantibodies(O．125-2lxg／m1)，whichmayneutralizetheinsulin．Real—timePCRandWesternblottingtechniqueswereappliedto●e．1ucidatetheinn．erlinks．Neitherprimaryrati