aj--fgla基因在仿刺参再生过程中的表达分析

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1、分类号：密级：学校代码：】Q165学号：2QUU193遣宇师箍大擎硕士学位论文Aj-fglA基因在仿刺参再生过程中的表达分析作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：吴阳天lJ口细胞生物学海洋动物细胞生物学侯林教授2014年03月学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：j乏0竭-学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留

2、、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：墨：i扭指导教师签名：—诬型隆一签名日期：吱Df4年6月6日辽宁师范大学硕士学位论文摘要纤维蛋白原样蛋白A属于纤维蛋白原超家族的成员，存在于脊椎动物和无脊椎的不同组织中。它在动物的先天免疫，伤VI愈合，凝血反应和组织、器官再生等许多生理生化过

3、程中起着重要的作用。我采用基因克隆(RACE)技术首次获得了仿刺参纤维蛋白原样蛋白A(Aj-fglA夕的全长cDNA序列，通过生物信息学对Aj-fglA进行了分析；采用原位杂交技术(ISH)分析了纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参四种不同组织中的表达部位；为了研究纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参体壁、肠和呼吸树三个组织中不同再生阶段的表达量，我们采用了荧光实时定量PCR技术(Real-time—PCR)。基因克隆结果显示：纤维蛋白原样蛋白A基因cDNA全长为1524bp，开放阅读框为849bp，编码282个氨基酸残基。生物信息学分析结果显示FGLA的N末端带有一个信号肽，

4、C末端带有一个FBG结构域，62bp的5’端非编码区，613bp的3’端非编码区。此蛋白分子量为31．96kD，理论等电点为5．64。根据此蛋白的特点，纤维蛋白原样蛋白A属于纤维蛋白原相关蛋白超家族。原位杂交结果显示，纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参的体壁、肠、纵肌和呼吸树四个部位均有分布。实时荧光定量PCR实验结果显示在体壁再生的第一组中，纤维蛋白原样蛋白A基因呈现出明显的上调趋势，在10min和40min时出新峰值，接着表达量下调，在体壁再生的第二组中，随着组织的再生，纤维蛋白原样蛋白A基因表达量继续上调，在5d达到最大值，最后恢复到正常水平。在肠和呼吸树中，纤维

5、蛋白原样蛋白A基因的表达量随着组织的再生也呈现出上升趋势，分别在20d和25d达到最大值。整理以上实验数据可以发现，在这三个组织的每一个再生阶段中纤维蛋白原样蛋白A基因的表达量均高于正常组织的水平，而只有当新组织再生完成后表达量才会逐渐恢复到正常组织的水平。由此可见，纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参的再生过程中起着重要的作用。仿刺参因其较高的营养价值和经济价值而深受人民的喜爱，如何提高其生长速度、降低因仿刺参的吐脏对生长的影响以及提高苗种成活率是刺参养殖业面临的主要问题。因此，研究仿刺参的再生过程、调控通路以及与之相关的分子机制具有较为重要的理论意义和实际应用价值。关

6、键词：仿刺参；纤维蛋白原样蛋白A基因；表达模式；组织再生Aj-fglA基因在在仿刺参再生过程中的表达分析ExpressionanalysisofApostichopusjaponicusfibrinogen-likeproteinAduringregenerationstagesAbstractFibrinogen·likeproteinA，amemberofthefibrinogen-relatedproteinsuperfamily，existsindifferenttissuesofvertebratesandinvertebrates．Itplaysimpo

7、rtantpartinmanyphysiologicalandbiochemicalreactionsincludinginnateimmuneresponse，woundhealing，bloodclotting，regenerationandSOon．Inthispaper,RACEtechnologywasperformedtoobtainthefull-lengthcDNAsequenceoftheAj-fgtAgeneforthefirsttime．Theputativeaminoacidsofthisgenewasanalysedbybioinfon