仿刺参多糖的提取分离及初步结构分析

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1、中国海洋大学硕士学位论文仿刺参多糖的提取分离及初步结构分析姓名：杨洁申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：吕志华201206仿刺参多糖的提取分离及初步结构分析摘要本文以仿刺参为原料进行了仿刺参多糖的提取、分离，并对仿刺身多糖中的糖胺聚糖进行了理化性质和结构分析。建立并优化了柱前衍生高效毛细管电泳法测定海参多糖单糖组成的方法，该方法具有简单、快速、分离效率高等特点，能同时测定海参多糖中氨基糖、中性糖及糖醛酸的组成，对于研究海参多糖的单糖组成有重要意义。仿刺参多糖提取采用木瓜蛋白酶水解、乙醇沉淀和醋酸钾沉淀法；分子量及其分布的测定采用高效凝胶渗透色谱法；化学组

2、成及其单糖组成分别采用传统化学方法和柱前衍生高效毛细管电泳法，并对两种方法的结果进行了对比；利用阴离子交换柱层析和凝胶柱层析对仿刺参多糖不同组分进行了分离纯化；仿刺参糖胺聚糖硫酸基的取代位置可以通过红外色谱法、核磁共振波谱以及质谱法测定；糖胺聚糖的支链和主链结构可以通过部分酸水解，凝胶柱层析分离，色谱分析测定。研究结果表明，通过温和的酶水解法的到的仿刺参多糖得率为1．18％o(以鲜海参计算)。GPC法得到的分子量为5万。仿刺参多糖总糖、蛋白质、硫酸基、糖醛酸及氨基糖含量分别为51．54％、5．50％、25．07％、17．20％和13．53％。气相色谱法测定其中

3、性糖结果表明仿刺参多糖主要含有岩藻糖，含量为15．4％。柱前衍生高效毛细管色谱法采用4mol／LTFA，110。C，6h的水解条件，利用1．苯基．3．甲基．5一吡唑啉酮(PMP)衍生，于紫外245nm处检测，进行毛细管电泳分析。实验对10种不同海参多糖进行了单糖组成分析，建立了高效毛细管电泳法测定海参单糖组成的方法。仿刺参多糖的单糖组成为GAIN：Glc：Man：Fuc：GAI：GIcUA=3．23：0．83：O．38：3．97：O．68：1．00，其对糖醛酸和氨基糖的组成测定结果和化学法测定结果基本一致，但对中性糖的测定，GC方法测定结果偏低。红外波谱结果表

4、明，仿刺参多糖中含有羧基、羟基、乙酰氨基、硫酸基和岩藻糖，在848em。1的吸收峰表明其硫酸基取代位置是岩藻糖的C．4位或者氨基半乳糖的C一4位。仿刺参多糖通过Q．FF阴离子交换树脂洗脱，分别在盐浓度为0mol／L、0．7mol／L和1．5mol／L时得到三个组分，随后进行透析除盐，利用凝胶柱层析分离纯化得到SC．1、SC．2和SC．3。利用高效毛细管电泳确定SC．1为硫酸岩藻多糖，SC．2和SC．3为两种不同的糖胺聚糖。结合红外光谱和1HNMR，我们推测SC．1存在少量的C．4位硫酸基取代；SC．2岩藻糖上3,4．双硫酸基取代和无硫酸基取代的1H化学位移信号

5、；SC．3岩藻糖上2，4．双硫酸基取代和3,4．双硫酸基取代的信号。关键词：仿刺参；海参多糖；柱前衍生高效毛细管电泳；分离纯化；结构解析Isolation，Fractionation，andPreliminaryCharacterizationofaPolysaccharidefromApostichopusjaponicusAbstractInthisstudy，weselectedApostichopusjaponicasasthematerialfortheisolation，fractionafionandpreliminarycharacteriza

6、tion．WehaveestablishedamethodofprecolumnderivatizationHPCE，whichcouldbeusedtoanalyzetheneutralsaccharide，uronicacidandaminosaccharide．ThisHPCEmethodhasthecharactersofbriefness，speedinessandhighefficiency，thatismeaningfulfortheanalysisofmonosaccharidecompositionofholothurianspolysacc

7、harides．PolysaccharidesfromApostichopusjaponicasWashydrolyzedbypapain，precipitatedbyethanolandpotassiumacetate，analyzedwiththetraditionalchemicalmethodsandprecolumnderivatizationHPCE，determinedit’SmolecularweightbyHPGPC，andelutedonQ-FFfollowingtheelutioncurve．Its’sulfatedpositionwas

8、detectedbyIR，1HNMRa