桑叶多糖pmp12的分离纯化及结构初步分析

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1、桑叶多糖PMP12的分离纯化及结构初步分析：赵明,常钰,王佩香,张磊,欧阳臻【摘要】目的：从桑叶中分离纯化获得均一多糖PMP12,并研究其组成及初步结构。方法：桑叶经热水提取乙醇分级沉淀,脱蛋白、脱色,经DEAE纤维素和SephadexG100凝胶柱层析,得到一个均一多糖组分PMP12,采用气相(GC)、高效液相(HPLC)、红外(IR)、核磁(NMR)、Smith降解和糖醛酸还原等方法分析其组成和初步结构。结果：PMP12由鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)和葡萄糖醛酸(GluA)组成,其摩尔比为Rha∶Ara∶Gal∶Glu

2、A=1∶1.56∶1.57∶1.08;PMP12主链主要是以β1→3糖苷键连接的鼠李糖,侧链主要是以β1→2糖苷键及β1→4糖苷键连接的阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖醛酸。结论：测定分析了桑叶多糖PMP12的组成和初步结构,为桑叶多糖的进一步研究提供依据。【关键词】桑叶;多糖;分离纯化;结构分析　　[Abstract]Objective:Tostudytheisolation,thepositionandcharacterizationofpolysaccharidePMP12fromMulberryleaves.Methods：Mulberrylea

3、vesovedbyTCAanditithdegradationanduronicacidreductionandsoon.Results：PMP12ismadeupofrhammose,arabinose,galactoseandglycuronicacidolarityrateof1∶1.56∶1.57∶1.08;InthePMP12,themainchainismadeupofβ1→3linkedrhammose.Thesidechainsareβ1→2andβ1→4linkedarabinose,galactoseandglycur

4、onicacid.Conclusion：ThestructureofPMP12inedfrommulberryleaves.Theseith降解和糖醛酸还原等方法对其组成和初步结构进行分析和研究。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　桑叶采集于江苏大学桑树园,经欧阳臻教授鉴定为桑科植物桑MorusalbaL.的叶,干燥后,粉碎,备用。DEAE纤维素(P12的提取、分离与纯化　　取粉碎后的桑叶1kg,依次用石油醚、乙酸乙酯和95%乙醇回流脱脂,残渣干燥后加5倍量蒸馏水,90℃提取4次,合并提取液,减压浓缩。加30%的三氯乙酸脱蛋白,离心,除去变性蛋白,

5、浓缩至一定体积,用氨水调pH值至8.0,加入过氧化氢进行氧化脱色(45℃保温1h)。透析除去过氧化氢及有机溶剂和小分子杂质后,浓缩至一定体积,加95%乙醇,使含醇量达到50%,于4℃放置过夜，离心收集沉淀，复溶于水，再次醇析，冷冻干燥后得粗多糖组分MP1。经DEAE52纤维素和SephadexG100凝胶柱层析,得较纯的水溶性多糖组分PMP12。　　1.4高效凝胶渗透色谱(HPGFC)测定多糖的纯度及相对分子质量[9]　　样品及系列标准多糖分别经HPGFC分析。色谱条件:JascoHPLC1500液相色谱系统,TSKGELG4000PP1210m

6、g,加入2mol/L的硫酸2ml,封管,100℃水解6h,中和水解液,离心,冷冻干燥;取各标准单糖和水解后的糖样,制备成糖腈乙酰化物,进行气相色谱分析。色谱条件:HP121000mm×0.2mm弹性石英毛细管色谱柱;载气为氮气;检测器为氢火焰离子化检测器(FID);柱温的起始温度130℃保留5min,程序升温4℃/min,中止温度240℃;汽化温度280℃;检测器250℃。　　1.6糖醛酸的还原[10]　　称取多糖PMP1220mg于10ml试管中,加2ml水溶解,用0.1mol/mlHCl调pH值至4.8。加入40mg水溶性的碳化二亚胺试剂(EDC

7、),室温下反应1h,同时用0.04mol/LHCl调节pH值使之保持在4.8。将反应物转移至50ml烧杯中,加入2ml新配的2mol/L硼氢化钾,于50℃水浴反应1h,再加入2ml新配的2mol/L硼氢化钾,于50℃水浴反应50min,加乙酸终止反应。反应物透析,冷冻干燥,干燥后的样品按上述操作再重复还原2次。冻干,水解,进行糖腈乙酰化后,进行气相色谱分析。　　1.7高碘酸氧化和Smith降解　　称取多糖PMP1215mg,加入15mmol/L高碘酸钠15ml,于室温,避光反应,每天定时取样,测定样品溶液在223nm波长处的光密度值,直到光密度值恒定为

8、止,加入乙二醇,终止反应,取2ml氧化液,加2滴酚酞作指示剂,用0.01mol/LNaOH滴定