仿刺参消化道中产酶菌株的筛选鉴定及其在仿刺参饲料中的应用

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1、'7:校编码10390分类号S917学号201211908014密级硕士学位论文仿刺参消化道中产酶菌株的筛选鉴定及其在仿刺参饲料中的应用指导教师：陈政强副教授作者姓名：田良串请学位级别：硕士学科专业：水产养殖研究方向：论文提交日期：2015年4月7日论文答辩日期：2015年613日学位授予单位：银美大学学位授予日期：2015年6月答辩委员会卞席：周时强教授论文评阅人:学术诚信声明兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研宄成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研宄成果。本人依法享有和承担由此

2、论文产生的权利和责任。声明人（签名）：函各时间：W“叫保护知识产权声明本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。作者（签名）:导师（签名）:时间：>ir-硕士学位论文仿刺参消化道中产酶菌株的筛选鉴定及其在仿刺参饲料中的应用ToselectstrainswithhigherenzymeactivityfromthedistinguishmentofA.Japonic

3、usanditsapplicationinfeed学科门类：农学作者姓名：田良指导教师：陈政强副教授学科专业：水产养殖研究方向：学位授予单位：集美大学论文答辩日期：2015年6月13日仿刺参消化道中产酶菌株的筛选鉴定及其在仿刺参饲料中的应用摘要从仿刺参(A.Japonicus)消化道中筛选出3株菌株，通过形态特征、生理生化特征和16SrDNA分子这三方面鉴定它们分别为：解淀粉芽孢杆菌X3-3（BacillusamyloliquefaciensX3-3）、甲基营养型芽孢杆菌X4-1（BacillusmethylotrophicusX4-1）和巨大芽孢杆菌X4-

4、5(BacillusmegateriumX4-5)。其中解淀粉酶芽孢杆菌X3-3和甲基营养型芽孢杆菌X4-1这两株细菌分泌消化酶活性较高，巨大芽孢杆菌X4-5则净水效果较好。通过单因素控制实验得出解淀粉酶芽孢杆菌X3-3和甲基营养型芽孢杆菌X4-1的最佳生长和产酶条件：解淀粉芽孢杆菌X3-3的最适生长温度34℃-37℃，最适初始pH为8.0，最适盐度为30。甲基营养型芽孢杆菌X4-1的最适生长温度为37℃，最适初始pH为7.0-8.0，最适盐度为30。在水质净化分析方面，采用萘乙二胺分光光度法测定水质中亚硝酸盐含量，用靛酚蓝分光光度法测定氨氮含量，结果表明，

5、巨大芽孢杆菌X4-5在改善养殖水质方面具有潜在的应用价值。研判这三株菌作为益生菌的实验包括各种安全性检测：对仿刺参消化道细胞的粘附作用、测定微生物对斑马鱼（Zebrafish,Daniorerio）毒性的饲养实验、针对病原菌的拮抗实验。结果表明，在以模式动物斑马鱼为宿主的攻毒试验中，与对照组相比较，实验组成活率没有发生显著变化，且成活率都高于90%；这三株菌在仿刺参消化道细胞中的粘附率都高于85%，说明这三种细菌对仿刺参消化道细胞有较好的粘附能力，能够在宿主肠道内栖息定植；在菌株调节肠道微生态方面，这3株菌均能够与假单胞菌和副溶血弧菌等致病菌产生拮抗作用。以

6、1%剂量添加于饲料中的实验结果表明，解淀粉芽孢杆菌X3-3无论是单独使用还是与巨大芽孢杆菌X4-5或/和甲基营养型芽孢杆菌X4-1联合使用皆能显著(P＜0.05)提升仿刺参的生长和消化酶活，30d和60d的检测结果差异不明显(P＞0.05)；三种菌制剂的联合使用在显著提升仿刺参体腔液AKP、ACP、SOD、LZM和POD等体液免疫相关因子活性水平效果优于两种菌的配伍使用(P＜0.05)，且除了解淀粉芽孢杆菌X3-3，与单一菌制剂相比，两两配伍的复合菌制剂对机体相关指标影响较大，差异显著(P＜0.05)。综合分析，效果最好的微生态制剂为三者联合使用的复合菌制剂

7、，能显著提升仿刺参特定生长率、消化酶活性和免疫相关因子水平，具有开发应用价值。关键词:益生菌；仿刺参；酶活力IToselectstrainswithhigherenzymeactivityfromthedistinguishmentofA.JaponicusanditsapplicationinfeedAbstractBacillusamyloliquefaciensX3-3,BacillusmethylotrophicusX4-1andBacillusmegateriumX4-5wereselectedfromA.Japonicusintestinalus

8、ingGramstaining,phenotypic