inos抑制剂ag和1400w对大鼠肺成纤维细胞ctgf表达和肌成纤维细胞表型转化的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文iNOS抑制剂AG和1400W对大鼠肺成纤维细胞CTGF表达和肌成纤维细胞表型转化的影响姓名：刘连凤申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：陈晓玲201203中文摘要iNOS抑制剂AG和1400W对大鼠肺成纤维细胞CTGF表达和肌成纤维细胞表型转化的影响摘要目的：肺纤维化(pulmonaryfibrosis，PF)是一种由多种因素引起的肺间质性病变。肺纤维化时，肺间质中的胶原纤维大多由肌成纤维细胞(Myofibroblast，MFb)合成。肌成纤维细胞是以表达Ot

2、．平滑肌肌动蛋白(smoothmusleactin，仅．SMA)为标志的成纤维细胞。氨基胍(aminoguanidine，AG)是诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)抑制剂；1400W是一种选择性较强的高效iNOS抑制剂。AG或1400W对于离体肺成纤维细胞结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)及肌成纤维细胞表型转化的影响目前尚未见报道。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)作为一种新

3、兴的基因水平调控技术，通过合成特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)沉默靶基因的表达，已成为基因功能研究和基因治疗的全新手段。因此，本实验通过离体观察AG署I：I1400W对大鼠肺成纤维细胞CTGF及仅．SMA蛋白表达的影响；并利用CTGFsiRNA技术阐明AG和1400W对肺成纤维细胞CTGF及肌成纤维细胞表型转化影响的机制，为评价iNOS抑制剂在肺纤维化防治中的作用提供资料。方法：体外分离培养原代雄性SD大鼠(130—1509)肺成纤维细胞；MTT法测定AG和1

4、400W对肺成纤维细胞存活率的影响；WesternBlot法测定肺成纤维细胞CTGF及仅．SMA的蛋白表达。结果：1TGF．13诱导肺成纤维细胞CTGF蛋白表达的最佳时间点基础状态的肺成纤维细胞是指正常培养的肺成纤维细胞。与相应的对照组相比，24h、48h、72hCTGF的表达均上调(尸

5、3(10ng／m1)束lJ激48h的肺成纤维细中文摘要胞。与相应的对照组相比，TGF一13诱导24h、48h、72h时TGF．B处理后的肺成纤维细胞CTGF蛋白表达均上调(尸0．05)，而当AG浓度达N5mmol／L、10mmol／L、20mmol／L、30mmol／L、40mmol／L或50mmol／L时，

6、其存活率显著增高(尸<0．01，P<0．001)。与对照组相比，1400W随浓度变化对两种状态的肺成纤维细胞存活率的影响均无统计学意义(P>O．05)。3AG和1400W对肺成纤维细胞CTGF及0c．SMA蛋白表达的影响3．1不同浓度的AG和1400W对基础状态的肺成纤维细胞CTGF蛋白及Q．SMA表达的影响与对照组相比，O．1mmol／L的AG对基础状态的肺成纤维细胞CTGF及仅一SMA蛋白表达无显著性差异(尸>0．05)，lmmol／L的AG明显上调CTGF及仅．SMA蛋白表达(尸<0．01)，

7、而10mmol／L、20mmol／L、30mmol／L的AG则剂量依赖性下调肺成纤维细胞的CTGF及0【．SMA蛋白表达(尸0．05)，160

8、nmol／L显著下调其表达(PO．05)，48h、72hCTGF蛋白表达均上调(尸