飞秒激光角膜基质透镜切除(relex)创伤愈合及机制研究

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1、复旦大学博士学位论文飞秒激光角膜基质透镜切除（ReLEx）创伤愈合及机制研究姓名：董子献申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：周行涛2012-03-30博士学位论文ReLEx创伤愈合及机制研究摘要第一部分飞秒激光角膜基质透镜切除(ReLEx)角膜愈合实验研究目的探讨飞秒激光角膜基质透镜切除(ReLEx)角膜愈合过程中的组织形态变化规律。方法健康成年新西兰大白兔21只，分为A组12只，B组9只，分别行飞秒激光LASIK与小切口透镜切除(SMILE)，设置的屈光矫正度数均为．6．00DS／-I．00DC。随机选取一眼作为术眼，另取未手术的3眼作为空白对照。采用扫描电子显微镜

2、对SMILE组术中取得的基质内透镜及飞秒激光LASIK组角膜瓣及基质床进行表面光滑度观察。术后裂隙灯显微镜密切观察角膜愈合情况，于术后1周、1月、3月分别进行光镜观察和透射电子显微镜(TEM)观察角膜基质细胞形态结构变化。结果两组手术均较顺利完成，所有术眼角膜实现了I期愈合，SMILE组术后水肿较飞秒激光LASIK组更快消退。光学显微镜检查结果显示，术后1周时SMILE组中央区角膜水肿程度轻于飞秒激光LASIK组，层间可见清晰间隙，飞秒激光LASIK组角膜瓣与基质床粘合，两组胶原纤维排列稍紊乱，切口边缘可见上皮栓形成；术后1月时，两组中央区角膜水肿均基本消退，基质层胶原纤

3、维的排列较1周时更加规则，SMILE组基质层间间隙基本贴合。术后3月时，两组中央区角膜各层结构基本完好，基质层胶原纤维排列较规则。TEM检查结果表明，术后1周及1月时两组角膜基质细胞可表现为线粒体肿胀，术后3月时两组角膜基质细胞基本恢复正常，胶原纤维排列规则。扫描电子显微镜检查结果表明，飞秒激光LASIK组角膜角膜瓣及基质床表面均具有较高的平滑度，SMILE组角膜基质内透镜正背两面的光滑程度均较理想，正面的光滑度优于背面。结论飞秒激光可安全完成较光滑的基质透镜；ReLEx术后角膜的创伤愈合反应优于飞秒激光LASIK，ReLEx术后早期层间间隙的临床意义有待进一步探讨。第二

4、部分飞秒激光角膜基质透镜切除(ReLEx)角膜基质细胞凋亡的研究目的探讨飞秒激光角膜基质透镜切除(ReLEx)术后早期角膜基质细胞凋亡的特点。方法健康成年新西兰大白兔24只，分为A、B两组，各12只，分别行飞秒激光LASIK和SMILE手术，设置的屈光矫正度数均为．6．00DS／．1．00DC。随机选取一眼作为术眼，另取未手术的6眼作为空白对照。于术后4h矛D24h取材，采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标法(TUNEL)检测角膜基质细胞的凋亡水平，并制作角膜超薄切片行TEM检查观察角膜基质细胞的形态改变。结果正常对照组未见TUNEL阳性细胞的表达。两组中央区角膜

5、均出现TUNEL阳性细胞，飞秒激光LASIK组主要分布于角膜瓣与基质床的交界面，SMILE组主要分布于角膜帽与下方基质床的交界面。术后4h及24h时，飞秒激光LASIK组凋亡细胞数均明显高于SMILE组，差异有统计学意义(P<0．01)。TEM检查结果表明，术后4h及24h时两博士学位论文ReLEx创伤愈合及机制研究组角膜基质中均可见凋亡或明显损伤改变的细胞。结论ReLExi；[起的角膜基质细胞凋亡水平低于飞秒激光LASIK，可能与小切口及不需要掀开角膜帽有关。第三部分飞秒激光角膜基质透镜切除(ReLEx)角膜基质细胞增殖炎症反应研究目的探讨飞秒激光角膜基质透镜切除(Re

6、LEx)术后角膜细胞增殖炎症反应特点。方法健康成年新西兰大白兔48只，分为A、B两组，各24只，分别行飞秒激光LASIK和SMILE手术，设置的屈光矫正度数均为．6．00DS／．1．00DC。随机选取一眼作为术眼，另取未手术6眼作为空白对照。于术后1d、3d、1周和1月取材，用于免疫荧光染色检测飚-67及CDllb的表达。结果飚．67免疫荧光结果显示，正常对照组角膜鼬-67仅在上皮层表达，两组术后中央区角膜基质均出现Ki．67阳性细胞，主要分布于层间基质切开层面。SMILE组角膜基质Ki．67Ig日性细胞数低于飞秒激光LASIK组，差异有统计学意义(P

7、d时Ki．671jB性细胞数最高，术后1周时两组均减少，术后1月时两组角膜基质中Ki．67的表达均很少。CDllb免疫荧光结果显示，正常对照组角膜未见有CDllbljfl性细胞的表达；两组术后中央区角膜基质均出现CDllb阳性细胞，飞秒激光LASIK组主要分布于角膜瓣与基质床的交界面，SMILE组主要分布于角膜帽与下方基质床的交界面。各时间点SMILE组CDllb口fl性细胞的表达量低于飞秒激光LASIK组，差异具有统计学意义(P<0．01)。结论ReLEx术后角膜增殖炎症反应较飞秒激光LASIK轻，可能与小切口以及不掀开角膜