荧光peg-pamam-tfdbait靶向递释系统的构建及其血脑屏障通透性的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文荧光PEG--PAMAM--Tf/Dbait靶向递释系统的构建及其血脑屏障通透性的研究姓名：许晶申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：章龙珍2012-02徐卅I医学院硕士学位论文荧光PEG．PAMAM．Tf／Dbait靶向递释系统的构建及其血脑屏障通透性的研究中文摘要目的构建Tf修饰的靶向血脑屏障的荧光PEG．PAMAM-Tf／Dbait递释系统及研究其对血脑屏障的通透性，为脑部肿瘤的治疗提供理论基础。方法1．荧光PEG．PAMAM．T优)bait的构建与鉴定：(1)采用三种物质(荧光RBITC、NI-IS．PEG-MAL．Tf)逐步共价修饰PAMAM，合成能

2、靶向血脑屏障的荧光PEG-PAMAM．Tf复合物，通过正负电荷相互吸引作用，放射增敏剂Dbait的负电荷与PAMAM表面的氨基NH2通过静电相吸，PAMAM将Dbait压缩进入空腔内部，构建荧光PEG．PAMAM．Tf／Dbait。(2)鉴定：通过氢核磁和SDS．PAGE鉴定荧光PEG—PAktAbt-Tf纳米载体，通过2．5％琼脂糖凝胶电泳鉴定PEG．PAMAM．Tf／Dbait递释系统稳定性。通过DnaseI酶和强阴离子SDS证明此递释系统包封完整、稳定。2．CCK8检测：PAMAM载体和经过PEG修饰的PAMAM载体作用于U87细胞24h后细胞的吸光度。3．体外血脑屏障的建立：

3、bEnd．3细胞培养5．7天，显微镜下观察其完全汇合，试漏实验及辣根过氧化物酶通透实验证明构建成功。4．荧光显微镜观察：通过转染小鼠脑毛细血管内皮细胞Bend．3细胞，观察荧光PEG．PAMAM．Tf／Dbait、荧光PAMAM／Dbait、荧光PEG．PAMAM／Dbait、三种纳米粒体外表达效率的不同，观察Tf对血脑屏障通透性的影响。结果1．通过1HNMR和SDS-PAGE表征：1HNMR图谱中，2．2-3．4ppm处为PAMAM的骨架峰，3．6ppm处为PEG中亚甲基的吸收峰，表明PEG．PAMAM合成成功，从SDS．PAGE结果可以看出，合成后的PEG．PAMAM．Tf条带的

4、分子量是115KD左右，说明PAMAM．PEG和转铁蛋白连接成功。2．5％琼脂糖凝胶电泳证明PEG．PAMAM．Tf包封Dbait成功。DnaseI酶和强阴离子SDS证明纳米粒包封完整、稳定。2．CCK8检测细胞增殖及毒性实验可以看出：随着PAMAM浓度的增加，细2徐州医学院硕士学位论文胞的OD值降低，而用PEG修饰PAMAM后与同等浓度下单纯PAMAM组比较，OD值较高(p

5、t载体高分子的体外性质考察，在PEG-PAMAM．Tf浓度为O．84uM时，荧光显微镜检测荧光强度最强。结论1．成功构建荧光PEG．PAMAM．T优)bait。2．经PEG修饰PAMAM后可以明显降低PAMAM载体对胶质瘤U87细胞的毒性。3：成功构建血脑屏障。4．转铁蛋白(Tf)的修饰可以增加纳米载体的血脑屏障通透性。关键词聚酰胺．胺；聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)；转铁蛋白(Transfetrin)；血脑屏障；类小干扰DNA分子(Dbait)徐卅l医学院硕士学位论文ConstructionofflourescencelabledPEG．nU坦AM．T佃b

6、aittargeteddeliveryreleasesystemanditsblood-brainbarrierpermeablilityAbstractObjectiveconstructionoftargetingblood-brain．barriernano—carriercomplexesRBITC．1abeledPEG．PAMAM．T￡，Dbaitandresearchontheblood-brainbarrierpermeability．Soprovideatheoreticalbasisfortreatmentofbraintumors．Methods1．constru

7、ctionofRBITC-labdedPEG-PAMAM-T胁bait：(1)inthisstudy，Polyamidoamine0'AMAM)wasappliedasthemainmacromoleculargenevectoLfluorescent(RBITC)，functionalpolyethyleneglycol(PEG)，abrain·targetingligand(Tf)WasselectedtoconjugatetoPAMAM，yieldi