花色相关基因的克隆鉴定及兰花遗传转化研究

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1、花色相关基因的克隆鉴定及兰花遗传转化研究陈洁201届2硕士中国林业科学研究院万方数据分类号S682.31密级公开UDC学位论文花色相关基因的克隆鉴定及兰花遗传转化研究Studyoncloningandidentificationofgenesrelatedtoflowercolorandgenetictransformationoforchid陈洁指导教师姓名李潞滨研究员申请学位级别硕士专业名称园林植物与观赏园艺研究方向植物细胞与基因工程论文提交日期2012年5月论文答辩日期2012年6月学位授予日期2012年7月答辩委员会主席评

2、阅人北京·中国林业科学研究院万方数据学位论文花色相关基因的克隆鉴定及兰花遗传转化研究学位论文作者陈洁指导教师姓名李潞滨研究员指导小组成员杨凯副教授申请学位级别硕士专业名称园林植物与观赏园艺研究方向植物细胞与基因工程论文答辩日期2012年6月中国·北京万方数据DissertationfortheDegreeCloningandanalysisofgenesrelatedtoflowercolorandgenetictransformationoforchidCandidate:ChenJieSupervisor:Prof.LiLub

3、inAssociateSupervisor:AssociateProf.YangKaiAcademicDegreeAppliedfor:MasterSpeciality:OrnamentalPlantsandHorticultureDateofDefence:June2012Degree-Conferring-Institution:ChineseAcademyofForestry万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含

4、其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研究院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研究院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（

5、保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：年月日年月日学位论文作者毕业联系方式工作单位：联系电话：15210926652电子邮件：chenjiexue@126.com通讯地址、邮编：万方数据摘要园林植物的花色直接影响其观赏价值。兰花是花卉产业中价值最高的种类之一，其花色的改良在兰花育种工作中一直备受关注。然而，由于兰花生长周期长、自然结实率低等原因，传统的育种周期较长。利用转基因手段进行兰花育种可以弥补传统育种的缺陷，具有较好的发展前景。本研究旨在通过对花色相关基因的克隆与功能鉴定，获得具有育种价值的花色相关

6、基因，用于兰花遗传转化，为通过转基因途径培育花色丰富的兰花新种质资源提供科学依据。本研究利用巢式PCR与PCR的方法从非洲堇与矮牵牛中克隆了花色形成过程中相关酶的基因，并将这些基因构建到植物表达载体上，通过转化模式植物对其进行了功能鉴定，随后进行了兰花转基因育种的初步研究。具体结果如下：1.从非洲堇中克隆出类黄酮3’5’-羟基化酶（flavonoid3’,5’-hydroxylase,F3’5’H）基因。该基因序列全长为1612bp，编码508个氨基酸；包含两个外显子和一个内含子，在894bp与980bp之间有一个长85bp的内含

7、子。在GeneBank上提交该序列，序列登录号为JF261509。2.从矮牵牛中克隆出二羟黄酮还原酶（dihydroflavonol-4-reductase,DFR）基因。该基因序列全长为1122bp，编码373个氨基酸，与NCBI上登录号为（AF233639）的矮牵牛（Petunia×hybrida）DFR基因序列相似度为100%。3.从矮牵牛中克隆出查尔酮异构酶（chalconeisomerase,CHI）基因。该基因序列全长为653bp，编码210个氨基酸，与登录号为（AB543054）的矮牵牛CHI基因序列相似度为100%

8、。4.构建了查尔酮合成酶（chalconesynthase,CHS）基因的pCAMBIA1304-senseCHS、pCAMBIA1304-antiCHS表达载体以及F3’5’H基因的pCAMBIA1304-F3’5’H表达载体。将表达载体质粒转化