atsus3基因的克隆及对棉花的遗传转化研究

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1、分类号Ｑ９４３密级公开学号１３２１４３硕±学位论文（学术型）题目巧基因的克隆及对棉花的遗传转化研究作者蔡云巧指导教师喻嘉宁教授—级学科名称生物学二级学科名称生物化学与分子生物学提交日期二〇—六年五月学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行研巧工作所取得的研究成果？尽我所知，除文中己经注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体己经发表或揉写过的研巧成果，也不包含本人或他人己申请学位或其他用途使用过的成果。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体，均

2、已在文中作了明确说明并表示谢意。一本学位论文若有不实或者侵犯他人权利的。，本人原意承担切相关的法律责任璋、心作者签名：ｂ曰期：如月曰／以学位论文知识产权及使用授权声明书本人在导师指导下所完成的学位论文及相关成果，知识产权巧属陕西师范大学。本人完全了解陕西师范大学有关保存、使用学位论文的规定，允许本论文被査阅和借阅，学校存反保留学位论文并向国家有关部口或妍构送交论文的纸质版和电子版，有权将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可抖采用任何复制手段保存？本人保证毕业离校后和汇编本论文，发表本论文或使用本论文成果时署名单

3、位仍为陕西师范大学。保密论文解密后适用本声明。作者签名：丢今鸣曰期：年Ｊ月曰摘要一。棉花，锦葵科棉属植物，是世界上主要的经济作物之棉纤维由胚珠部分＇表皮细胞发育形成ｅ－ｃｏｓｅ，涉及许多基因的表达调控。ＵＤＰＧ（ｕｒｉｄｉｎ５ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕ）是纤维素合成的底物，庶糖合成酶（ＳｕｃｒｏｓｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＳｕＳｙ表皮细胞产生）可作用于ＵＤＰＧ，同时降低细胞中ＵＤＰ（ｕｒｉｄｉｎｅ邮ｈｏｓｐｈａｔｅ）的含量，提髙细胞膨压，促进细胞伸长及纤维素合成。棉花无绒毛突变体和野生型０ＤＰＡ（ｄａｙｐｏｓｔａｎｔｈｅ

4、ｓｉｓ）的胚珠比较，表皮细胞突起锐减，同时未检测到ＳｕＳｙ的转录及酶活性。棉花中庶糖合成酶３（沉胤）基因的低表达，会导致０ＤＰＡ胚珠表面突起减少，３ＤＰＡ的棉纤维变短。知Ｓｔ／Ｗ基因的表达Ｓｔ／Ｓ成员本实验室前期工作发现干涉拟南芥，引起其它代偿性増加，进而促进转基因拟南芥抽苔、果实成熟，其角果产率也均高于野生型植株。在此基础上，，本研究克隆了如沉化？基因并将此基因连接植物表达载体ＰＢＩ１２１，转化农杆茜ＬＢＡ４４０４，利用两种方法对棉花进行遗传转化，Ｗ期获得转Ａ沉度３棉。己取得的结果如下：１．克隆心化／说基因。从拟南芥

5、中克隆处沉７５义该基因ｃＤＮＡ全长２４３０ｂｐ，编．００ｋＤａ．码８０９个氨基酸，Ａ怯ＵＳ３的分子量为９２，理论等电点为５８５，疏水性平－０均值为．２７６ｅｕ，，含量最丰富的氨基酸为ＬＧ山，Ｖａｌ，创ｙ。蛋白结构预测分析表明Ａ怯ＵＳ３蛋白属于糖基转移酶家族，含有２个功能域，即Ｎ端的薦糖合成结构－３４螺旋占．４９％域和Ｃ端的糖基转移结构域。在Ａ议ＵＷ的二级结构中，ａ，随机。－卷曲占４８．９５％，延伸链占１６．５６％其中，ａ螺旋和随机卷曲是ＡｔＳＵＳ３最主要的结构元件。－人ＳＷ３２．构建表达载体。将如化獻基因连入表达载体ＰＢＩ１２

6、１，命名为：ｐＢＩｌ＾，并转入农杆菌ＬＢＡ４４０４中。利用农杆菌介导棉花下胚轴转化法对棉花进行转化。选取饱满、脱绒的棉种无菌培养，将生长７天后的棉花子叶下胚轴切段，通过农杆菌侵染３分钟，漂洗后共培养４８小时，在抗性培养基上诱导形成愈伤组织，再一进步诱导形成胚巧愈伤组织。，通过化胎发生等过程获得再生植株３．分析嫁接方法。分别对劈接法，合接法，贴接法等方法进行分析，结果表明；嫁接±培苗时合接法成活率最高，劈接法嫁接后棉苗生长最好。无菌苗嫁接中，。劈接法成活率最高，棉苗生长良好４．获得转瓜Ｓｔ／Ｗ棉花。转佔ｔ／Ｗ基因的再生植株通过劈接

7、法嫁接获得１９株转火ＳＬ獻棉花。通过ＥＬＩＳＡ方法研究了转基因棉花中庶糖合成酶（ＳｕＳ）薦糖转ｙ，Ｉ化酶（ＩＮＶ），瞧糖碟酸合成酶（ＳＰＳ）的含量及酶活性，结果表明：转基因棉花普遍高于野生型棉花，但各阳性株系间存在差异。５．探索棉花活体胚转化外源基因的方法。用含外源基因ＧＦｆ的农杆菌侵染去掉？半个子叶的棉花种子胚，农杆菌〇〇６〇〇为０．４０．６，侵染３小时，共培养４８小时，用含１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素的ＭＳ基础培养基筛选，生长３０天后的棉苗在卡那霉素敏感性实验具有抗性，在ＤＮＡ水干，转录水平上均可检测到ＧＦｆ，棉花叶片也可检

8、，，测到绿色巧光，但４０天后外源基因表