糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶对mmp-9timp-1比值的调控及大黄酸对其作用

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1、分类号VDC博士学位论文密级糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶对MMP．9／TIMP．1比值的调控及大黄酸对其作用Integrin—linkedKinaseRegulatestheratioofMMP一9／TIMP-1inTubularEpithelialMyofibroblastTransdifferentiationofDiabeticNephropathyandtheRoleofRhein作者姓名：彭琳琳学科专业：内科学学院(系、所)：湘雅医院导师：宁建平教授论文答辩日期迎l生!!粥答辩委员会主席中南大学二。一二年十月原创性声明本人声明

2、，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：鹬生盟日期：逸f兰年业月鲨日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位

3、论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名互呲导师签名_二壹童翌日期：丝年旦月整日博士学位论文中文摘要摘要研究背景与目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)己成为目前终末期肾病(End—stagerenaldisease，ESRD)的主要基础病之一，其主要病理改变为肾间质细胞外基质聚积最终导致肾间质纤维化。既往研究表明，肾小管上皮细胞．肌成纤维细胞转分化(tubularepithelialmyofibrob!asttransdifferentiati

4、on，TEMT)在其过程中发挥了重要作用。整合素连接激酶(integrin-linkedkinase，ILK)是一种与整合素细胞内区域相结合的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，在调节细胞粘附、迁移、基质积聚等过程中起重要作用，与肾脏疾病的发生发展密切相关。研究表明ILK是TGF．pl／Smad信号传导途径的重要下游效应分子，也是该信号传导途径诱导TEMT的关键步骤，参与ECM聚积过程。基质金属蛋白酶．9(matrixmetalloproteinases．9，MMP．9)可降解包括Ⅳ型胶原在内的多种ECM成分。金属蛋白酶组织抑制剂．1(tissueinhibitor

5、ofmetalloproteinase．1，TIMP一1)作为MMP一9的抑制物可与其特异性结合，保持动态平衡。发生TEMT时，MMP．9表达增多，引起MMP．9／TIMP．1失衡。高表达的MMP一9可特异性过度降解小管基底膜的Ⅳ型胶原，破坏基底膜。转分化的肾小管上皮细胞随后穿过断裂的基底膜，到达肾间质成为MyoF，促进间质纤维化的进一步发展。MMP．9／TIMP．1失衡可能是TEMT过程中的促进因素。大黄酸(rhein)作为大黄的主要有效成分，已被证实对肾脏有保护作用。本课题组通过前期研究发现，大黄酸可以抑制糖尿病肾病TEMT的发生，但其作用是否与调节

6、ILK表达及影响MMP-9／TIMP一1比值，抑制TEMT及纤维化的进展有关?尚不清楚。本研究拟从糖尿病肾病患者、糖尿病肾病大鼠、与体外高糖环境博士学位论文中文摘要下人肾小管上皮细胞培养三个研究层面入手，观察在DN小管间质病变中，肾小管上皮细胞转分化与ILK、MMP一9／TIMP-1表达的改变，同时采用ILK小分子干扰RNA技术(siRNA)特异性抑制ILK的表达，进而探讨ILK对Ml、佃．9／TIMP．1的调控机制及其在TEMT中的作用；同时用大黄酸干预处理，观察大黄酸对DN的治疗作用及其对上述过程的影响，旨在从TEMT的角度探讨DN发病的具体机制及中

7、药大黄防治DN的可能新靶点。方法：1．收集糖尿病肾病患者肾穿刺活检标本，使用HE染色、PASM染色及Masson染色方法，了解其肾脏损伤程度；免疫组织化学方法检测肾组织中E．cadherin、0【．SMA的表达水平，并与正常肾组织比较，以观察人糖尿病肾病发病过程中是否存在TEMT。2．饲养8周龄健康雄性Wistar大鼠，随机分为正常组(12只)，糖尿病组(12只)、大黄酸组(12只)及缬沙坦组(12只)。分别于第8、16周末，每组各处死6只大鼠，肾脏原位灌洗后，取肾组织，固定于蜡块中并切片。HE染色检测肾小管间质损伤程度，Masson染色方法观察肾问质胶

8、原相对面积，免疫组织化学方法检测E．cadherin、0【．SMA、TGF．Bl