磁性纳米四氧化三铁颗粒及汉黄芩素逆转k562a02细胞多药耐药的研究

《磁性纳米四氧化三铁颗粒及汉黄芩素逆转k562a02细胞多药耐药的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、东南大学硕士学位论文磁性纳米四氧化三铁颗粒及汉黄芩素逆转K562/A02细胞多药耐药的研究姓名：程林申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：陈宝安2012-05-22中文摘要磁性纳米四氧化三铁颗粒及汉黄芩素逆转K562／A02细胞多药耐药的研究东南大学医学院附属中大医院研究生程林导师陈宝安目的本课题旨在观察磁性纳米四氧化三铁(MagneticNanoparticleofFe。04，MNPs-Fe304，洲Ps)、汉黄芩素(wogonin，Wog)以及柔红霉素(Daunorubicin，DNR)三者共聚

2、合对K562／A02细胞多药耐药(Multidrugresistance，MDR)的影响及作用机制，为体内和临床试验提供重要的理论和实验依据。方法(1)应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析DNR、MNPs，Wog、DNR联合Wog、MNPs共聚合DNR，MNPs共聚合DNR和Wog分别作用于K562／A02细胞24h、48h及72h之后的细胞生长抑制情况；(2)采用透射电镜(TransmissionElectronMicroscope，TEM)和普鲁士蓝染色法(Prussianbluestaining

3、)观察MNPs在细胞内的位置分布及形态特征；(3)应用流式细胞术(flowcytometry，FCM)检测不同分组药物作用48h后K562／A02细胞的凋亡率及细胞内柔红霉素浓度；(4)采用RT-PCR法检测K562／A02细胞及各用药组作用48h后基因mdrl的mRNA表达水平；(5)采用Westernblot法检测K562／A02细胞及各用药组细胞P—gp表达水平。结果(1)MTT结果示作用K562／A02细胞株48h后，Wog在0—40umol／L，州Ps在0-0．4(v：y)均无明显的细胞生长抑

4、制作用(生长抑制率<1096)，同时，DNR，DNR+Wog，DNR一删Ps及DNR-Wog-MNPs共聚物组对K562／02细胞均表现生长抑制作用，呈时间依赖性和浓度依赖性。DNR，DNR+Wog，DNR—MNPs及DNR—Wog—NNPs共聚物组48h的DNRIC50值分别为34．84±3．1llamol／L、7．19±0．65mlamol／L、8．94±0．82lamol／L、3．93±O．33Pmol／L：(2)透射电镜结果显示0．1(v：v)的心Ps作用细胞后存在于吞饮小泡中，对细胞形态无明显

5、影响，单个MNP电镜下测得直径为16．72±1．37nm，普鲁士蓝染色显示O．1(v：v)的MNPs作用K562／A02细胞48小时后，100％的细胞中有呈蓝东南大学硕士学位论文染颗粒纳米粒子团；(2)流式细胞仪检测各用药组48h凋亡率结果示2pmol／LDNR和20啪ol／LWog及0．1(v：v)MNPs与对照组间无明显差别(乃0．05)，DNR+Wog，2pmol／LDNR—MNPs及2mnol／LDNR—Wog-MNPs共聚物凋亡率较其他组明显升高，具有统计学意义(P<0．05)，并且DNR-W

6、og—MNPs共聚物组凋亡率较其余各组均明显升高(JP

7、．48％，DNR—Wog—MNPs组为75．80％±4．32％(尸<0．05)；(5)Westernblot法检测K562／A02细胞及各用药组作用48h后，较空白对照组P—gp在Wog组的蛋白表达抑制率为dO．62％±2．57％，DNR+Wog组为69．93％±4．63％，DNR—Wog—MNPs组为79．51％±d．48％(尺0．05)。结论：1)MNPs以胞吞作用进入K562／A02细胞，48小时100％的细胞内均可见蓝染的铁粒子；2)DNR—Wog—MNPs作用于K562／A02细胞可发挥显著的

8、细胞毒作用，其IC∞值较其他组(DNR、DNR+Wog、DNR—MNPs)明显降低；3)DNR—Wog—MNPs显著诱导K562／A02细胞凋亡，凋亡率较其他组明显升高；4)DNR—Wog—MNPs作用K562／A02细胞48小时后，细胞内柔红霉素荧光强度显著高于其余各组；5)DNR-Wog-MNPs作用K562／A02细胞48小时后，mdrl表达下调，较其余组显著降低；6)DNR—Wog—MNPs作用K562／A02细胞48小时后，P—g