布地奈德干预对哮喘小鼠肺组织中il-17和rorγt mrna表达水平的影响

布地奈德干预对哮喘小鼠肺组织中il-17和rorγt mrna表达水平的影响

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1、徐州医学院硕士学位论文布地奈德干预对哮喘小鼠肺组织中IL--17和RORγtmRNA表达水平的影响姓名:卞芳芳申请学位级别:硕士专业:儿科学指导教师:王军;武怡2012-04徐州医学院硕士学位论文布地奈德干预对哮喘小鼠肺组织中IL一17和ROR3,tmRNA表达水平的影响中文摘要目的通过研究哮喘模型外周血OPThl7细胞百分率及肺泡灌洗液中IL一17水平、肺组织ROR丫tmRNA表达水平,以及给予布地奈德干预治疗后的影响,来探讨支气管哮喘的发病和治疗机制。方法健康雌性Balb/c纯系小鼠(徐州医学院实验动物中心提供)30只,6—8周龄,体重22.249,普通

2、级,按随机数字表法分为3组(每组10只):(1)模型组及BUD治疗组:均于第0、7、14天给予OVA/AI(OH)3混合液0.2ml(内含OVAl00pg,Al(OH)31mg)腹腔注射(i.P.,intraperitoneal),第21—26天每天将小鼠置于5L密闭容器中以2%的OVA生理盐水(NS,normalsaline)溶液10ml雾化吸入激发30min或出现哮喘样发作为止。另外,治疗组于第0、1、7天及每次雾化前给予布地奈德雾化液5ml(含BUDlmg),每次30min。(2)对照组则在致敏阶段以AI(OH)3替代OVA/AI(OH)3腹腔注射,在

3、激发阶段以NS替代OVA雾化。各组于最后一次激发24h,即第27天处死动物进行各项检测。采用HE染色评价各组小鼠气道炎症程度:流式细胞术(FCM)检测各组小鼠外周血中Thl7细胞数量的动态变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素.17(IL一17)水平;逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测肿组织RORytmRNA表达水平。结果1.小鼠临床表现及肺组织病理改变:模型组小鼠出现了烦躁不安,头面部抓挠,鼻扇,呼吸急促,i,J.肢缩抬,反应迟钝,步态不稳,蛙跳等典型哮喘表现,严重者呼吸减慢或呼吸节律不整,口鼻轻度

4、紫绀,四肢瘫软,行动迟滞或俯伏不动;连续激发后小鼠毛色失去光泽,取出动物可见遗留较多排泄物。治疗组小鼠症状表现较轻,24小时内精神,毛发,食欲均可获得不同程度上的恢复;对徐州医学院硕士学位论文照组小鼠一般情况良好。光镜下,哮喘组小鼠肺泡间隔增宽,支气管管腔变小,管壁增厚,小血管及细支气管周围可见到大量炎症细胞浸润;BUD治疗组病理改变较模型组轻:对照组小鼠细支气管及肺泡结构基本正常,无明显炎症细胞浸润。2./J、鼠外周血Thl7细胞的百分率、占CD4十T细胞比例:模型组(5.090/社1.01%、22.66%+3.65%)明显高于正常对照组(2.19%士0.

5、21%、7.90%-+0.61%),均为P<0.01;BUD治疗组(3.470/硅0.77%、14.26+3.28%)比模型组降低,均为P<0.01。3./j、鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)中IL.17水平:模型组较对照组明显增高(27.28:53.64pg/mlVS6.58+2.32pg/ml,19.51+2.23pg/mlVS5.49+2.62pg/ml均为P<0.01),BUD治疗组较模型组降低(12.04+2.28pg/mlVS27.28+3.64pg/ml,9.82+1.94pg/mlvs19.51:52.23pg/ml,均为P<0.01)。4.小

6、鼠肺组织中ROR,),邯一actinmRNA比例:模型组(O.81-4-0.07)较对照组(O.33+0.02)明显增高,BUD治疗组(0.54:50.03)较模型组组降低,均为P<0.01。结论布地奈德可以通过抑制哮喘小鼠肺组织RORl,t的表达,进而抑韦OThl7细胞增值,减少IL一17细胞因子释放,从而减轻哮喘气管炎性反应,达到改善哮喘炎症病理改变的效果。关键词哮喘;小鼠;Thl7;IL.17;ROR,/t;布地奈德;气道高反应性徐州医学院硕士学位论文EffectofbudesonideonIL一17andRORytmRNAinthemodelofas

7、thmaticmouseAbstractObjectiveToexploretheeffectofbudesonideonThl7cellsandtheexpressionofIL.17andRORvtmRNAinamodelofasthma.MethodsThirtyfemaleB1ab/cmicewererandomlydividedintothreegroups,includingthenormalcontrolgroup,themodelgroupandtheBUDtreatedgroup,with10miceineachgroup.Inmodelg

8、roup,miceweresensitizedwit

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