高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-a(sp-a)的mrna和蛋白表达及布地奈德的干预作用

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1、硕士学位论文论文题目高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用研究生姓名何蓉指导教师姓名肖志辉专业名称儿科学研究方向新生儿论文提交日期2013年3月高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用中文摘要高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用中文摘要目的：1．建立新生大鼠高氧肺损伤的动物模型；2．观察与比较高氧性损伤时新生大鼠肺组织的病

2、理组织学改变，以及肺表面活性物质相关蛋白-A（pulmonarysurfactantprotein-A，SP-A）的mRNA及其蛋白的表达变化，从而探讨SP-A在新生大鼠高氧肺损伤发生、发展中可能的作用；3．探讨吸入性糖皮质激素布地奈德（budesonide，BUD）是否通过调控SP-A的表达从而发挥对高氧肺损伤的保护作用，为临床防治高氧肺损伤提供理论依据。方法：取108只出生1天内的新生SpragueDawley（SD）大鼠（雌雄不限）随机分成三组：即Ⅰ组：空气组（对照组），Ⅱ组：高氧＋生理盐水组（高氧组），Ⅲ组：

3、高氧＋布地奈德组（干预组），每组36只。Ⅰ组置于空气中；将Ⅱ、Ⅲ组实验动物持续暴露于90％～95％氧箱中，直至实验结束。Ⅱ组于每日雾化吸入NS10ml，Ⅲ组每日同一时间点吸入溶解BUD的等量的NS(含BUD2mg)。设立实验后3、7和14天3个时间观测点，处死动物，行支气管肺泡灌洗，测定灌洗液中蛋白含量；取肺组织，计算肺湿/干重比；HE染色观察组织病理学变化；WestenBlot方法检测SP-A蛋白含量、RT-PCR方法检测SP-AmRNA表达水平。结果：1．各组实验动物一般情况：Ⅰ组（空气组）中的实验动物在实验期间

4、精神状态佳、活动灵活，进食正常。Ⅱ组（高氧组）中的实验动物逐渐出现症状，表现皮毛无光泽、精神萎靡、活动少,脱氧后烦躁不安,呼吸困难明显,鼻尖发绀,恢复供氧可逐I中文摘要高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用渐缓解；Ⅲ组（干预组）中的实验动物情况介于前两者之间。2．肺组织病理切片：Ⅰ组（空气组）实验动物肺组织病理切片见肺组织结构规整，无炎症反应，肺泡大小、形态均一；Ⅱ组（高氧组）高氧暴露3d后可见肺血管扩张充血，肺泡腔内出现红细胞及炎性细胞，肺间隔断裂，

5、肺泡腔扩大；高氧7天时，炎性渗出、肺水肿、肺出血较前更加明显，部分肺间隔增宽变形，肺组织结构紊乱；14天时更为明显，肺组织结构紊乱，肺间隔重度增厚，出现明显纤维化改变，肺泡发育受阻，肺泡数量明显减少、大小不一，肺泡腔明显增大,部分肺泡融合，可见肺大泡或肺不张。Ⅲ组（干预组）肺组织形态与结构改变较II组有明显减轻。3.肺组织湿/干重比值（W/D）：实验3天、7天时，Ⅱ组（高氧组）实验动物肺组织湿/干重比值（W/D）较Ⅰ组（空气组）增高（P<0.01），实验14天时，Ⅱ组较Ⅰ组升高更明显（P<0.01），而Ⅲ组（干预组）

6、与Ⅱ组相比，3天、7天、14天的比值均有明显下降（P<0.01）。4.支气管肺泡灌洗液（BLAF）中蛋白含量（TP）测定：实验3天、7天和14天时Ⅱ组（高氧组）BLAF中TP均高于Ⅰ组（空气组），差异有显著性意义（P<0.01）；Ⅲ组3天时BLAF中TP较II组降低（P<0.05），7天、14天时明显降低（P<0.01）。5.肺组织中SP-A蛋白表达水平的变化：WestenBlot检查测定结果表明：与I组动物比较，II组（高氧组）实验3天时SP-A蛋白表达明显增高（P<0.01）；7天、14天SP-A蛋白表达下降，1

7、4天时下降更明显（P<0.01）。Ⅲ组（干预组）实验3天时SP-A蛋白表达介于I组与II组之间（P<0.05），7天、14天SP-A蛋白的表达均较高氧组组显著升高(P<0.05)。6.肺组织中SP-AmRNA表达水平的变化：RT-PCR检查测定结果表明：与I组动物比较，II组实验3天时SP-AmRNA表达水平明显增高，差异有显著性意义(P<0.05)；7天时可见表达下降，14天时下降更明显(P<0.01)。III组的SP-AmRNA表达水平接近于I组SP-AmRNA的表达趋势；实验3天时SP-AmRNA表达水平介于I

8、组与II组之间，与II组比较有显著性意义(P<0.05)；7天、14天时表达水平较II组显著升高(P<0.05)。结论：1.高氧对新生大鼠肺组织有损伤作用，并随吸氧时间的延长而加重。主要病理变化为肺组织局部水肿和出血、炎症渗出、结构组织紊乱、肺泡发育障碍、肺泡数目II高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）的mRNA和蛋