人羊膜间充质细胞诱导成骨修复兔牙槽突裂的实验研究

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1、遵义医学院硕士学位论文人羊膜间充质细胞诱导成骨修复兔牙槽突裂的实验研究姓名：王芳申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：宋庆高201205遵义医学院硕士学位论文人羊膜问充质细胞诱导分化成骨修复兔牙槽突裂的实验研究人羊膜间充质细胞诱导成骨修复牙槽突裂的实验研究中文摘要目的：通过对人羊膜间充质细胞(hAMCs)体外诱导分化为成骨细胞，经明胶海绵搭载移植修复兔牙槽突裂，为牙槽突裂组织工程修复寻找理想的种子细胞来源。方法：采用手术方式在兔上颌骨制造一个1．0cm×0．5cm楔状缺损，建立兔双侧牙槽突裂模型。采用机械法和酶分离法从人羊膜组织中分离出hAMCs，并进行体外培养，第三代细胞用流式

2、细胞仪(FCM)分别检测表面分子CD44、CD29、CD45、CD34、CDl66和CD71的表达情况，并采用免疫细胞化学方法检测波形蛋白进行细胞表型鉴定。对鉴定为hAMCs的第三代细胞加入DEX、VitC和B．GP进行定向诱导，使其向成骨细胞分化，21天后用茜素红S检测钙盐沉积判定其是否向成骨细胞分化。将认定分化成成骨细胞者应用到动物实验中。根据移植物的不同将建立的牙槽突裂兔随机分为A组(hAMCs与明胶海绵复合体：n=12)、t3组(经诱导后hAMCs与明胶海绵复合体：n=12)、C组(单纯明胶海绵移植：n=12)，D组(空白对照：n=4)。于移植后2w、4w、6w、8w、12w处死

3、各实验组2只实验动物，D组实验结束时一并处死。对移植区牙槽骨的厚度进行测量，常规HE染色及免疫组化染色以观察移植区新骨形成及细胞存活情况。结果：①第三代的hAMCs呈长梭形，漩涡样生长，表达CD29、CDl66、CD44、CD73、波形蛋白，不表达CD34、CD45，并能很好的粘附生长于胶原．明胶海绵上；②经地塞米松、维生素C和B．甘油磷酸钠，诱导21天后可检测出茜素红染色阳性的钙结节；③经手术移植后2w、4w、6w、8w、12w处死各实验组2只兔，12W大体标本示：A、B两组牙槽突缺损处大量骨质沉积，缺损处得以修复，C组：骨面粗糙，缺损处有骨质充填，缺损变小，变浅；D组：缺损变小，内侧

4、见薄层骨质充填，中切牙牙根暴露或仅有少许骨质包绕。12w后在移植区牙槽骨厚度比较，A与B组，P>0．05；A与C、D组比较，P<0．05，B与c、D组比较P<0．05，C与D比较P<0．05。④HE染色：A，B两组在术后2W可见成骨细胞聚集区，但B组出现钙盐沉积较A组早，C组各个时期均未发现成骨细胞聚集区。⑤移植后12周A组与B组经免疫组化检测到抗人细胞核抗体的细胞存在，C、D组未检测到抗人细胞核抗体的细胞。结论：1、hAMCs表达典型的间充质干细胞的表面标志，可以在体外诱导成骨；4遵义医学院硕士学位论文人羊膜问充质细胞诱导分化成骨修复兔牙槽突裂的实验研冗2、hAMCs及诱导成骨后都可以

5、很好的生长于胶原．明胶海绵；3、hAMCs及成骨诱导后的hAMCs均可在体内成活；4、hAMCs可在体内分化骨，但其体内分化的机制、植入细胞存活率、分化率、转归还有待进一步研究；5、hAMCs有望成为组织工程修复牙槽突裂地种子细胞。关键词：人羊膜间充质细胞牙槽突裂修复成骨分化AstudyofhAMCscharacteristicsanditsosteoblasticdifferentiationtorepairAlveolarCleftinrabbitsAbstractObjective：Thestudyassessedthepotentialforhumanamnioticmesenc

6、hymalcellstodifferentiateintoosteobalstsandtransplantbygelatinspongetorepairthealveolarcleftofrabbis，toinvestigatethefeasibilityofhAMCsasseedcellsofboneandtissueengineering．Methods：The40adult．rabbitwereselected，and1．0cmx0．5cmAlveolarcleftofuppermandibleonbilateralwaspreparedtoestablishtherabbitma

7、xillarybonedefectforonemonth．hAMCswereisolatedfromamniontissuebyenzymaticallydigestedandmechanicallyminced．theantigensexpressionofCD44，CD29，CDl66，CD45，CD34andCD71wereexaminedandanalyzedbyflowcytometry(FCM)；Thecellswere