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1、联合应用成骨诱导后骨髓间充质干细胞与PLGA支架材料修复兔桡骨缺损的实验研究：王岩松，刘丹平，梅晰凡【摘要】目的研究聚乳酸聚乙醇酸复合物(Po(yclactic-co-glycolicacid),PLGA)支架作为组织工程骨支架修复骨缺损的可行性。方法体外培养兔骨髓间充质干细胞(bonemarroalcells,BMSCs)，在成骨诱导剂地塞米松等的诱导下，向成骨细胞转化，并使之与修饰后PLGA支架复合，植入兔桡骨缺损模型，作为实验组。对照组a为PLGA材料对照，对照组b为空白对照，通过影像学观察骨缺损的修复情况。结果地塞米松等诱导组细胞形
2、态向类成骨细胞转化，碱性磷酸酶表达明显增高，并表达Ⅰ型胶原。应用多聚赖氨酸修饰的PLGA与成骨诱导的BMSCs复合植入骨缺损后，与对照组相比影像学显示明显促进骨缺损的愈合。结论适当浓度成骨诱导剂可成功的将兔骨髓间充质细胞向成骨细胞诱导，诱导后细胞与PLGA支架联合应用可较好修复兔桡骨缺损。【关键词】骨髓间充质细胞;成骨诱导;PLGA载体Abstract:ObjectiveToinvestigatethefeasibilityofPLGAasscaffoldmaterialinbonetissueengineering.MethodsThep
3、urifiedbonemarroalcellsrabbitethasone,β-glycerophophateandVitaminCandco-culturedodifiedPLGAinvitro，thenimplantedthemintothedefectsofrabbitsastheexperimentgroup，inthecontrolgroupA,onlyPLGAplanted，incontrolgroupB,nothingplanted.TheresultsoftheinducedcellsbyDexamethasoneentgr
4、oup,12edcallus.Inthetedandthedefectsarroalcellscanbeinducedintomarroalosteoblastsbysuitablecontentsofdexamethasone.ModifiedPLGAisagoodscaffoldmaterialforthebonetissueengineering. Keyarroalcells;osteoblastsinduction;Poly(lactic-co-glycolicacid) 骨缺损修复一直是骨科临床面临的一大难题，组织工程骨再造
5、被认为是最有前景的骨缺损治疗修复方法之一。组织工程化骨构建首先需要适合的种子细胞，在一定诱导条件下，可使BMSCs向成骨细胞分化的数目大大增加[1,2]，且取材方便，是良好的骨组织工程种子细胞。 PLGA作为迄今研究、应用最多的一种生物可降解合成材料，广泛运用于骨、软骨、血管、神经、皮肤等组织，并已获得美国FDA的批准用于临床，显示出良好的应用前景[3,4]。PLGA具有良好的生物相容性、可降解性和可塑性等优点并可精确地控制其分子量、降解时间及孔隙率和孔径等性能。该材料也存在一定的缺点，如疏水性强，与细胞的亲和性差，不利于种子细胞在支架上
6、的黏附等，从而影响组织工程化骨组织构建的成功率。如果采取一定的改良修饰，如应用多聚赖氨酸，胶原等，可使其亲和性改善，满足骨组织工程支架的要求。 本实验体外培养兔骨髓间充质干细胞，在成骨诱导剂的诱导下，向成骨细胞转化，并将其作为种子细胞，PLGA为支架材料，植入兔桡骨缺损模型，观察对骨缺损的修复情况。 1实验材料和方法 1.1实验材料与试剂 1.1.1实验材料96孔培养板和24孔培养板,胎牛血清,胰蛋白酶，TritonX-100,地塞米松，维生素C,β-甘油磷酸钠，碱性磷酸酶试剂盒，多聚赖氨酸，PLGA载体，I型胶原原位杂交试剂盒。
7、1.1.2实验动物1.5月龄健康新西兰大耳白兔27只(由锦州医学院实验动物中心提供，动物质量许可证号：SYXK(辽)2003-0011)，体重2kg。 1.1.3实验仪器倒置相差显微镜,AT-858自动酶标分析仪，CO2培养箱，超净工作台，X光机。 1.2实验方法 1.2.1兔骨髓间质干细胞的分离和培养[5]无菌条件下分离培养兔骨髓间质干细胞。 1.2.2兔骨髓间质干细胞的成骨诱导及鉴定细胞传至第3代后，进行成骨诱导,实验分诱导组和非诱导组，诱导液为10-8mol/L地塞米松,10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L维生素C,倒
8、置相差显微镜下观察细胞形态变化，分别在适当的时间测定碱性磷酸酶含量、Ⅰ型胶原的表达情况、Vonkossa染色。 碱性磷酸酶含量测量0.25%胰蛋白酶消化细胞后，细胞计数，以20
