n-乙酰氨基葡萄糖转移酶v通过ve-cadherin及β1整合素介导内皮细胞的生物学效应

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1、重庆医科大学硕士学位论文N--乙酰氨基葡萄糖转移酶V通过VE--cadherin及β1整合素介导内皮细胞的生物学效应姓名：李佳佳申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：于超201205重庆医科大学硕士研究生学位论文N一乙酰氨基葡萄糖转移酶V通过VE．cadherin及p1整合素介导内皮细胞的生物学效应摘要血管内皮细胞连续的覆盖在在全身血管内膜上，研究发现内皮细胞的生理功能除了是血液和组织的屏障，还具有其他多种功能，如降低血管通透性，调节血液与组织的物质交换，减少无序侵入的血浆成分和血液细胞的数量；通过合成和分泌相关

2、因子调节血管平滑肌功能；抑制白细胞的游走和侵入。鉴于这些生理功能，血管内皮细胞的损伤是诸如动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等一系列疾病的始动环节。因此，研究血管内皮细胞损伤的机制为心血管疾病的治疗提供科学依据。本文主要探讨血管内皮细胞生物学功能发生变化时，存在着调控VE．cadherin，Dl整合素的糖基化“开关"。这种作用有可能是通过GnT—V催化作用进而分配VE—cadherin，pl整合素上N—glycans的丰度影响内皮细胞功能。第一部分：N．乙酰氨基葡萄糖转移酶V通过粘附分子VE．cadherin调控内皮细胞与

3、单核细胞的粘附本研究首先运用THP—l单核细胞与内皮细胞的粘附实验确定IL—lD促进血管内皮细胞与单核细胞粘附的最佳时间点和浓度点。其次通过Westemblot及Lectinblot检测发现，IL—lp(1鹇。L～，5岭‘L～，25腭·L。1)处理EA．hy926细胞24小时后，细胞中GnT-V蛋白及重庆医科大学硕士研兜生学位论文pl一6G1cNAc糖支链的表达下调，同时细胞中总VE．cadherin蛋白水平上调。同法IL一1p(5鹇·L‘1)处理EA．hy926细胞后，采用免疫共沉淀法检测VE—cadherin上p

4、一1，6G1cNAc糖支链的变化，发现IL．1p可使VE—cadherin上D．1，6GlcNAc糖支链结构减少。另外，研究发现随着IL—lp(1鹇·L一，5肛g·L一，25鹏·L。1)浓度增加，VE—cadherin复合物中p-catenin大量与其脱离。为了深入探索研究GnT-V在内皮细胞中对VE—cadherin复合物的影响，通过细胞中GnT-V基因敲除和过表达正反两个方面阐述GnT_V作用的可能性。实验结果证明当GnT-V下调或上调，B．1，6G1cNAc糖支链相应随着变化；同时，VE．cadherin，VE

5、—cadherin上p．1，6G1cNAc糖支链的变化相应随之减少或增加。另外，p—catenin从VE．cadherin复合物上脱落的量也相应的增加或减少，THP．1单核细胞与内皮细胞的粘附能力增强。为了验证IL—lp能够通过影响GnT-V进而损伤内皮细胞，在GnT-V过表达后加入IL一1p(5肛g·L。)处理，与GnT-V过表达结果恰好相反。综上表明：GnT．V可能通过改变细胞中VE．cadhedn上p．1，6GlcNAc糖支链进而影响血管内皮细胞的生物学行为，炎症因子IL．1p可能通过影响GnT-V导致内皮细胞

6、损伤。第二部分：IL．1D通过pl整合素糖基化修饰诱导EA．hy926细胞凋亡IL．1p是白细胞介素l细胞因子家族的成员之一，是最重要的炎症细胞因子之一，它介导了炎症的重要过程，已有研究显示IL-lD可以导致血管内皮细胞功能紊乱。认清这种细胞功能紊乱的机制，将会为动脉粥样硬化的形成机制提供较好的理论依据。为了探讨IL—lp对血管内皮4细胞损伤机制，以EA．hv926血管内皮细胞为研究对象，利用不同浓度IL—lp刺激24h，采用Westemblot方法检测IL一1p对p1整合素，Bcl一2，Bax，Caspase．3及

7、N一乙酞氨基葡萄糖转移．V(GnT-V)表达的影响；通过Lectinblot方法显示IL—lp对GnT-V所修饰的所有糖蛋白量的影响；免疫共沉淀方法检测IL—lp对pl整合素糖基化修饰量的变化；流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果显示IL．1p可从蛋白翻译水平抑制pl整合素的表达，同时可以下调Bcl．2／Bax的比例，上调Caspase一3的表达。初步揭示IL—lp诱导血管内皮细胞凋亡可能是通过pl整合素N一连接糖基化作用来完成的。综上所述，IL．1p可通过调控EA．hy926细胞p1整合素的糖基化修饰，增加细胞凋亡

8、率，损伤血管内皮细胞。关键词：IL．1p；pl整合素；VE—cadherin；GnT_VN．ACETⅥ．GIl砌AMNⅥ脓ANSFERA皿VREGIJIATEDENDOTHEIIAI，CE硼B10IoGICALE嗣匝CTV认B1肿EGR烈ANDVE℃ADHER州ABSTRACTVascmarendotheliumiscontinuouscove