下调n-乙酰氨基葡萄糖转移酶-v对前列腺癌细胞放射治疗和激素治疗敏感性的影响

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文下调N．乙酰氨基葡萄糖转移酶．V对前列腺癌细胞放射治疗和激素治疗敏感性的影响InhibitionofGnT-Venhancedsensitivityofradiotherapyandhormonetherapyinhumanprostatecancercellline课题来源：广东省科技计划项目学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院黄惠怡张健教授肿瘤学专业型硕士第二临床医学院2013年3月30日广州硕士学位论文下调N．乙酰氨基葡萄糖转移酶．V对前列腺癌细胞放射治疗和激素治疗敏感性的影响硕士研究生：黄惠怡指导教师：张健教授

2、摘要一、研究背景前列腺癌是发生在男性中最常见的恶性肿瘤之一，并且随着年龄的增长，其发病率越来越高。据报道，在20世纪80年代晚期以及90年代早期，美国新诊断的前列腺癌病例已超过肺癌作为男性中发病率最高的的肿瘤疾病[1】。目前，前列腺癌的常见治疗方法包括：根治性的手术、放疗、内分泌治疗、化疗等。放射治疗作为传统治疗手段之一，广泛应用于不同分期的前列腺癌：早期前列腺癌的放射治疗可以达到根治的目的，效果与根治性手术相似；局部晚期前列腺癌采取放疗结合内分泌治疗可提高存活率[2】；有远处转移者，姑息放疗可以缓解局部症状，改善生活质量。但临床发现部分病人因放疗抵抗导致放疗后局部

3、复发，预后不佳[3】。提高放射剂量可以减低肿瘤局部复发率，但是高剂量放疗伴随的副反应，如肠道损伤、泌尿系统受损、性功能障碍等，却严重影响患者的生活质量【4】。此外，内分泌治疗是晚期前列腺癌姑息治疗的主要方法，虽然最初可获得很高的有效率，但是相当一部分病人在治疗2．5年后病情进展为激素抵抗性前列腺癌(HI冲C)，最终导致治疗失败。长时间内分泌治疗诱导肿瘤细胞产生激素抵抗性的同时，对放射治疗的耐受性同样得到提高【5】。因此，如何提高前列腺癌放射治疗以及激素治疗敏感性成为治疗前列腺癌亟须解决的一个问题。生物体内的大多数蛋白质都是以糖蛋白的形式存在，而细胞表面糖蛋白寡糖摘要

4、链的结构重塑对糖蛋白功能起重要的作用，已发现，这些寡糖链与细胞的分化、粘附、增殖、肿瘤的侵袭和转移密切相关【6】。而寡糖链的产生、结构的改变是通过糖基转移酶介导。越来越多的证据表明，与糖基转移酶基因的变化可以直接影响肿瘤组织细胞表型发生转变[6][7]。糖基转移酶N一乙酰氨基葡萄糖转移酶(N—acetylglueosaminyl—transferase—V，GnT-V)为糖蛋白N．糖链加工酶之一，主要分布在高尔基体中，其作用为决定N．糖链类型及复杂型糖链结构，催化形成N．糖链的p-1，6分支。已发现GnT-V对肿瘤的生长、转移起重要作用[8】【9】【lO]。在许多恶

5、性肿瘤组织中G11T．V呈现高表达，提示不良的预后，如乳腺癌、结肠癌和肝癌[11】【12】[13]。GnT-V影响肿瘤生物活性主要是通过改变p一1，6分支结构从而上调EGFR信号通路，抑制蛋白酶体的降解，抑制E．cadherin／13．cmemn复合物功能，最终促进肿瘤的生长和转移[14】[15】[16]。尽管目前很多实验表明GnT-V和多种肿瘤的恶性生物学行为密切相关，但是尚未有研究报导GnT-V和前列腺癌之间的关系。在本实验中，我们主要关注GnT-V的表达是否影响前列腺癌的生物学行为，并进一步探讨其相关的内在机制。二、研究目的此前，本课题组通过体内、外实验，比较

6、干扰GnT-V表达前后PC3细胞的增殖、凋亡情况，发现下调Gn■V表达可以增加激素非依赖型前列腺癌细胞株PC3的放射敏感性，并进一步研究其中可能涉及的相关机制。但是G11T-V表达与激素依赖型前列腺癌细胞的放射敏感性是否存在同样关联却未被研究。在本实验中，我们利用shRNA，构建低表达GnT-V的激素依赖型前列腺癌细胞株LncapGnT-W1079以及LncapGnT-1v／1564。通过体内及体外实验对比正常的Lncap细胞和低表达Gn■V的Lncap细胞的放射敏感性差异。另外，本实验还进一步探讨Gn■V与前列腺癌细胞(Lncap，PC3)激素治疗敏感性的关系。最

7、后，通过细胞周期、凋亡蛋白家族、细胞信号通路方面研究GnT-V影响前列腺癌细胞放射敏感性、激素敏感性的内在机制。三、实验方法Tl硕士学位论文l、pGPU6／GFP／NeoGnT-VshRNA质粒的构建及鉴定：由上海吉玛公司完成。2、细胞培养及转染人前列腺癌细胞株Lncap在37。C5％C02条件下，培养于含10％新生牛血清的RPMI．1640中，每周传代1．2次。Lncap细胞培养至对数生长期，参照invitrogen公司Lipof融锄iIle2000州产品说明书，用脂质体Lipofectamine2000TM将质粒导入Lncap细胞。用G418筛选阳性细胞克隆