free β-hcg和pappa光激化学发光免疫分析试剂的研制

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文Freep-hCG和PAPPA光激化学发光免疫分析试剂的研制DevelopmentofDiagnosticReagentsforFreep-hCGandPAPPADetectionusingAmplifiedLuminescentproximityHomogeneousAssay(AlphaLISA)课题来源：国家科技重大专项(2009ZXlo004—706)专业名称免疫学学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员邹丽萍吴英松教授朱家勇教授余新炳教授李明教授董文

2、其教授徐伟文研究员论文评阅人余新炳教授徐伟文研究员2012年5月20日广州硕士学位论文游离13一促绒毛膜性腺激素和妊娠相关血清蛋白光激化学发光免疫分析试剂的研制硕士研究生：邹丽萍指导教师：吴英松教授摘要研究背景及目的唐氏综合征(Down’SSyndrome，DS)又称先天愚型，是一种发生于胎儿的遗传性疾病，其发病率在新生儿中约为1／600．1／800，据初步统计，我国每年出生唐氏综合征患儿约2．7万，平均每20min就有l例出生，占智能发育不全患儿的10％。DS是一种最常见的染色体遗传病，是由于第2

3、1对染色体异常导致的胎儿智力发育障碍，其主要特征为严重的先天性智力障碍、特殊面容，并多伴有严重的心脏病或多发畸形，生活不能自理。目前唐氏综合征还无法治疗，患儿的出生将给社会和家庭带来极大的经济负担和精神压力。近年来优生优育的观念被大部分人接受，完善产前检查成为需要，唐氏综合征筛查也成为了热点。如何在产前发现唐氏综合征胎儿，防止和降低唐氏患儿的出生，是当前产前筛查提高我国出生人口素质的重要任务。大约10年前于妊娠中期利用孕妇血清中甲胎蛋1刍(alpha．fetoprotein，AFP)、人绒毛促性腺激

4、素(humanchorionicgonadotropin，HCG)、游离雌三醇(unconjugatedoestriol，uE3)等标记物产前筛查)lfiJLDown综合征(DS)的方法已在国际上得到公认。但孕中期筛查并发现DS后需引产，而孕早期筛查并发现DSLL之孕中期具有能尽早减轻病人因引产而带来的精神和肉体的痛苦等优点，故受到人们的关注，之后Wald等及Haddow等综合了9个国家21个产前诊断中心的研究结果，用7种血清标志物以不同组合作筛查进行比较，对包括FreeIB-hCG、PAPPA摘要

5、在内的7种标记物进行了综合分析，发现FreeIB-hCG与PAPPA的双联检测在孕早期的检出率最高，与孕中期的多联检测的检出率相当。之后随着高分辨率超声技术的发展，超声在产前筛查及产前诊断中的应用越来越广。BianchiDW的研究发现孕早期FreeIB-hCG与PAPPA的二联检测血清筛查结合彩色多普勒超声(NT)可达至1J86．3％的检出率，是目前被认为最常用，最有效的妊娠早期联合筛查方案，也是唐氏综合征产前筛查的趋势。从目前国内外各医院产前筛查的检测方法看，大部分是标记免疫分析技术，此技术具有灵

6、敏度高、特异性强等优点，已被广泛应用于产前筛查各血清标志物的基础和临床各个领域的应用研究。目前最常用的标记免疫分析技术是酶联免疫分析(Enzymaticimmunoassay，EIA)、化学发光免疫分析(Chemilinescentimmunoassay，CLIA)和时间分辨荧光免疫分析(Time．resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)，但EIA、CLIA、TRFIA在应用中存在着一些缺陷：EIA检测为一种定性，至多为半定量检测，EIA酶的活性容易受各种外在因素的影响而失活

7、，导致EIA的灵敏度不高，酶的大分子标记容易影响被标记物的空间结构，使得EIA灵敏度的提高受到限制；CLIA影响因素较多，易受环境干扰，发光时间短，化学反应后样品只可检测一次，无法重复测量，并且为非开放性试剂，未国产化，试剂价格高；TRFIA是目前国内外产前筛查的主要免疫分析技术，但该技术测量方式复杂，反应时间长，需通过洗涤分离结合标记与游离标记，仪器成本及维修费用高，环境及样品中同位元素可导致本底干扰。近年来，由于新原理、新技术的不断应用，标记免疫技术得到了一定的发展。光激化学发光免疫分析(Amp

8、lifiedLuminescentProximityHomogenousAssay，AlphaLISA)技术起源于1994年发明的单线态氧分子能量传递发光免疫分析技术(LuminescemOxygenChannelingImmunoassay、LOCI)，后美国PerkinElmer公司生产相关试剂(AlphaScreen⑧)，作为近年兴起的新型定量均相免疫学检测技术，采用了以聚苯乙烯胶乳为载体的纳米微球，实现了均相免疫测定，使操作快速简便，易实现自动化规模化检测，此