人促卵泡激素和黄体生成素光激化学发光免疫分析试剂的研制

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文人促卵泡激素和黄体生成素光激化学发光免疫分析试剂的研制Developmentoftheamplifiedluminescentproximityhomogeneousimmunoassayfordetectionofhumanfollicle—stimulatinghormoneandluteinizinghormone课题来源：国家科技重大专项(2009ZXl0004—706)专业名称免疫学学位申请人林冠峰指导教师吴英松教授答辩委员会主席答辩委员会成员朱家勇教授余新炳教授李明教授董文其教授徐伟文研究员论

2、文评阅人余新炳教授郝文波副研究员2012年5月20日广州硕士学位论文人促卯泡激素和黄体生成素光激化学发光免疫分析试剂的研制硕士研究生：林冠峰指导教师：吴英松教授摘要研究背景及目的标记免疫学，就是将标记技术和免疫学技术相结合进行分析测定的一门学科，是集基础医学、实验技术和临床应用于一体的学科，其基本原理是利用抗原抗体反应的高度特异性和各标记物的高灵敏可测量性来检查体内各种生物活性物质的活性和浓度。随着标记技术、单克隆抗体技术和分子生物学技术的不断发展与完善，标记免疫学己广泛应用于医学、农业、环境及食品检测等多个领域。目前该方法包括一系列的免

3、疫分析技术：荧光免疫分析(FIA)、放射免疫分析(ⅪA)、酶免疫分析(EIA)、胶体金免疫分析(GICA)、时间分辨荧光免疫分析(TI江IA)、化学发光免疫分析(CLIA)等。这些传统标记免疫学技术在应用中存在着一些不足：EIA酶容易失活，导致EIA的灵敏度不高，被标记物的空间结构易受到酶的大分子标记影响，使得EIA灵敏度的提高受到限制；TI心IA测量方式复杂，仪器成本及维修费用高，环境及样品中同位元素可导致本底受到干扰；CLIA影响因素较多，例如发光时间短，易受环境干扰，化学反应后样品只可检测一次，无法重复测量，并且为非开放性试剂，试剂

4、价格昂贵；而且，EIA、CLIA和TRFIA等均以微孔板为反应载体，需要洗涤来分离结合标记与游离标记，整个操作过程步骤多、周期长、样品消耗大、不易自动化等缺点。因此，开发新型标记免疫技术非常有必要，一种新型定量免疫分析技术光激化摘要学发光免疫分析(Amplifiedluminescentproximityhomogenousimmunoassay，AlphaLISA)技术应运而生。该技术起源于1994年发明的单线态氧分子能量传递发光免疫分析技术(Luminescentoxygenchannelingimmunoassay,LOCI)，随后

5、美国PerkinElmer公司研制相关科研试剂(AlphaScreen@)。作为近年兴起的新型定量均相免疫学检测技术，它克服了传统标记免疫学技术需洗涤分离结合标记与游离标记的缺点。它结合单线态氧半衰期短、纳米材料和激光技术等优势，实现了在均相中进行反应的操作过程。光激化学发光免疫分析技术具有操作简单、背景信号低、检测重复性好、无放射性污染、不需分离结合标记与游离标记、高通量、易于自动化和高灵敏度等优势，代表了现在及未来分析检测技术的发展趋势。人促卵泡激素(humanfollicle．stimulatinghormone，llFSH)由垂体

6、前叶分泌，为单链多肽激素。hFSH的增高多见于原发性睾丸衰竭、睾丸精原细胞瘤、先天性睾丸发育不全、先天性卵巢发育不全、原发性闭经、原发性性腺功能低下、更年期综合征；其降低常见于女性不孕症，长期服用避孕药，大量应用性激素等。因此定量检测血清中hFSH的浓度对临床疾病的诊断有重要意义。人促黄体生成素(humanluteinizinghormone，hLH)为垂体前叶嗜碱性细胞所分泌的激素，为糖蛋白，分子量约为30000道尔顿。hLH分子由两条非共价连接的不同肽链(c【和D)组成，0【链与人促甲状腺激素(hTSH)，人促卵泡激素(hFSH)及人

7、绒毛膜促性腺激素(hCG)相似，但p链的氨基酸顺序和组成不同，使其具有特异性，决定hLH的生物活性。对于女性来说，hLH的急速上升和急速变化，可促使排卵并形成黄体：对于男性来说，hLH也叫做促间质细胞激素，主要是促进睾丸间质细胞增生，促进睾酮的合成与分泌。在健康月经周期女性中，hLH浓度变化受排卵周期的影响，因此测定血清中hLH浓度可以预测女性排卵状况。此外，hLH的浓度变化和体内很多疾病的发生也有直接的联系，定量检测出血清中hLH的浓度对临床疾病的诊断有重要意义。本研究采用光激化学发光免疫分析(AlphaLISA)技术研制llFSH和h

8、LH定量II硕士学位论文检测试剂，评价各项性能指标，并与其它检测试剂盒进行比较，评价其在临床检测应用中的可行性。方法：采用双抗体夹心法研制人促卵泡释放激素和黄体生成素光激化学发光免疫分析试剂。