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《浅谈促甲状腺素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制11》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果浅谈促甲状腺素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制11【摘要】 目的:研制人血清中促甲状腺素的化学发光免疫检测试剂盒。方法:采用辣根过氧化物酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体(mAb),与固相包被的抗TSHα亚单位的另一mAb配对,以鲁米诺作为底物,采用两步法建立了双位点夹心法人血清TSH的化学发光免疫定量分析法。结果:该方法灵敏度为/L,批内CV平均为%,批间CV平均为%,平均回收率为%。该检测与LH、FSH和
2、HCG无交叉反应。部分实验样品的测试结果显示该试剂与国外同类试剂的测定结果明显相关(r＝)。结论:该方法具有较高的灵敏度、重复性和准确度,与其他同类产品相比简便、快捷、成本低,适于临床检测和科研应用。【关键词】促甲状腺激素化学发光免疫分析法试剂盒促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,thyrotropin,TSH)是一种由垂体前叶分泌的糖蛋白激素,由α和β2个亚基组成,相对分子质量(Mr)为28000[1]。TSH本身受下丘脑分泌的TSH释放激素TRH的调控,TSH的主要生理作用是调节甲状腺激素的合成与分泌,血液中甲状腺
3、激素水平与腺垂体分泌TSH的量之间有负反馈抑制关系[2]。甲状腺功能改变时,TSH的波动较甲状腺激素更迅速且明显,是反映下丘脑垂体甲状腺轴功能的敏感指标,课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果因此采用灵敏度高的TSH免疫分析法具有重要的意义。化学发光免疫分析(chemiluminescentimmunoassay,CLIA)是一种灵敏的免疫
4、分析方法,在免疫诊断试剂研制中已得到了广泛的应用[3]。本研究根据化学发光免疫分析法的原理研制了血清TSH的检测试剂盒,与国内外同类产品相比具有简便、快捷、成本低等优点。1材料和方法材料TSH单克隆抗体(mAb)、TSH标准品抗原和辣根过氧化物酶为Sigma公司产品,光免板为ThermoElectron公司产品,化学发光底物为BioRad公司产品。方法标准品的配制将TSH抗原标定后溶于小牛血清中,配制成含,1,,0,100mIU/L的标准溶液。抗体包被板的制备将100μL含TSHmAb的碳酸盐缓冲液加至包被板中,7℃包被h,再用含10mg/LBSA
5、的mol/L磷酸盐缓冲液于37℃封闭h后晾干备用。酶标记物的制备TSH的酶标记物采用过碘酸钠法制备,然后经mol/L磷酸盐缓冲液透析过夜后,加入等量的甘油于-20℃保存备用。检测方法将50μL待测样品或标准品加入包被TSH的光免板中,7℃温育30min,弃反应液,用洗涤液洗5次,加酶标记物50μL,7℃温育30min后同样用洗涤液洗5次,课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解
6、，特别是博士生必须有创新性的成果然后加入发光底物于5～10min内测定各孔的发光值RLU。样本中的TSH浓度依据由标准品TSH浓度和对应的RLU建立的数学模型进行定量。2结果.1动力学性质在HRP鲁米诺H2O2发光体系中,将不同量的免疫复合物加入发光液中,发光强度随反应时间而变化。10min后RLU接近峰值,在5～1min内RLU较为稳定,随后开始缓慢下降。.2反应条件优化.加样量对RLU的影响样本和酶标记物的加样量分别为50μL和100μL考查标准品RLU,发现加样量为100μL与50μLRLU相差不大,说明50μL的加样量反应能达到平衡(图
7、1)。图1加样量对RLU的影响.反应模式对RLU的影响采用二步法。第一步:加入标准品和待测样品后,将反应体系在37℃分别温育15、0、5、0min;第二步:加入酶标记抗体后,将反应体系在37℃分别温育15、0、5、0min。结果表明温育时间为30min时反应皆能达到平衡(图2)。图2温育时间对RLU的影响A:第一步温育时间对RLU的影响;B:第二步温育时间对RLU的影响..3稳定性将试剂盒放置于37℃d后,课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济
8、具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果比较与放置前参考标准
