自身免疫性甲状腺疾病患者体内滤泡辅助性t淋巴细胞的变化

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1、江苏大学硕士学位论文自身免疫性甲状腺疾病患者体内滤泡辅助性T淋巴细胞的变化姓名：朱晨露申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：王胜军20120620江苏大学硕士学位论文摘要目的：通过研究自身免疫性甲状腺疾病(autoimmunethyroiddisease，AITD)患者体内滤泡辅助性T淋巴细胞(follicularhelperTcell，Tfhcell)的变化，探讨Tfh细胞在AITD致病机制中发挥的作用。方法：1．采用流式细胞术(flowcytometer,FCM)检测AITD(36

2、例Graves病和29例桥本甲状腺炎)患者和健康对照者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)中Tfla细胞的比例，并进行比较。2．应用化学发光免疫分析法检测AITD患者的抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-thyroperoxidaseantibody,TPO—Ab)、抗促甲状腺激素受体抗体(anti—TSHreceptorantibody,TSHR-Ab)和抗甲状腺球蛋白抗体(anti—thyroglobulinantibody,Tg-Ab)的

3、水平，以及游离三碘甲腺原氨酸(freetriiodothyronine，FT3)、游离甲状腺素(freethyroxine，FT4)的水平，分析各种抗体水平，激素水平与Tfh细胞比例的相关性。3．追踪随访8例Graves病(Graves’disease，GD)患者，通过FCM检测患者治疗前后Tfh细胞比例的变化情况。4．磁珠分选人PBMC中CD4+T细胞，用植物血细胞凝集素(ph”ohemagglutinin，PHA)束I]激后，采用实时荧光定量PCR(real．timefluorescence

4、quantitativePCR，qRT-PCR)检测患者和健康对照者CD4+T细胞中IL．21和Bcl．6mRNA的相对表达情况。酶联免疫吸附试验自身免疫性甲状腺疾病患者体内滤泡辅助性T淋巴细胞的变化(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测CD4+T细胞培养上清中IL．21的分泌情况。5．取5例桥本甲状腺炎(Hashimotothyroiditis，HT)患者甲状腺组织，进行病理切片，免疫荧光染色后，采用激光共聚焦显微镜观察CD4+CXCR5+细胞的分布情

5、况。分离甲状腺组织单个核细胞(thyroidmononuclearcell，TMC)，FCM检测CD4+CXCR5+T淋巴细胞上ICOS的表达情况；RT-PCR检测TMC中IL．2l和Bcl．6mRNA的相对表达情况。结果：1．以CD4+CXCR5+ICOSh汹g或CD4+CXCRS+PD．1h鼬来标记外周血中Tfh细胞；GD组、HT组与健康对照组相比，Tfh细胞的比例均有明显上调(P

6、O．Ab水平分别与外周血中的Tfh细胞的比例具有正相关性(P=-0．0130，r=0．4893；P=-0．0341，r=0．4253)；HT组患者血清Tg-Ab、TPO—Ab水平分别与外周血中的Tfh细胞的比例具有正相关性(P=o．0168，r--O．5152；P=0．0417，r=0．4479)。3．GD组患者具有较高的FT3和FT4水平，血清FT3、FT4水平分别与外周血中的Tfh细胞的比例具有一定的正相关性(P=-0．0305，r=0．4332；P=-0．0611，r=0．3798)。4．

7、跟踪随访了8例GD患者，其中有4例患者治疗后外周血中Tfh细胞的比例有不同水平的降低。江苏大学硕士学位论文5．GD组和HT组患者外周血中CD4+T细胞的IL．21mRNA相对表达水平均显著高于健康对照组(P

8、分子ICOS；与单纯性甲状腺肿患者相比，HT患者TMC中具有较高的IL．2l和Bcl．6mRNA相对表达水平。结论：1．在AITD(Graves病和HT)患者外周血中观察到了Tfh细胞(CD4+CXCR5+ICOS拓ghT细胞)比例的增加，在HT患者甲状腺中也观察到Tfh细胞的存在。2．在Graves病和HT患者体内，Tfh细胞的比例与TSH．Ab、Tg-Ab和TPO．Ab的水平成正相关，并且对于GD患者，Tfh细胞的比例与血清中FT3、FT4成一定水平的正相关；部分治疗后GD患者的Tfh细胞的