组蛋白修饰相关基因在ipsc及结肠肿瘤干细胞中表达的初步研究

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1、浙江大学博士学位论文组蛋白修饰相关基因在iPSC及结肠肿瘤干细胞中表达的初步研究姓名：史钟申请学位级别：博士专业：肿瘤学指导教师：郑树；王荣福201205浙江大学博士学位论文摘要组蛋白修饰相关基因在iPSC及结肠肿瘤干细胞中表达的初步研究浙江大学医学院博士研究生导师肿瘤学史钟郑树教授王荣福教授中文摘要研究目的检测组蛋白修饰相关基因在沪sc(诱导性多能干细胞)和人类胚胎干细胞(hES)中的mRNA表达谱，以筛选在从成体细胞到iPSC的转变过程中可能较重要的组蛋白修饰相关基因，并进一步检测其在结肠癌肿瘤干细胞中的表达情况，以

2、寻找潜在的新型恶性肿瘤预警及干预标志物。实验方法及结果将人类包皮成纤维细胞，人类iPSC，hES细胞系H9于相同标准化条件下培养，提取总RNA，通过定量realtimeRT．PCR的手段检测58个组蛋白修饰相关基因的mRNA表达，发现有3个基因在iPsC和hES细胞中都明显升高(>5倍改变)，分别为Jarid2、KMT5C和PRMT8；有3个基因在iPSC和hES细胞中都明显降低(>5倍改变)，分别为Mina、Phf2和KMT7。推测这6个在组蛋白修饰相关基因在iPSC的转变过程中有可能起到关键作用，并在GenBank数

3、据库中查询归纳这些基因的背景及功能。在结肠癌细胞系S、Ⅳ480中，我通过克隆球培养得到肿瘤干细胞较为富集的样本，以定量realtimeRT．PCR的手段检测上述6个组蛋白相关基因的mRNA在正常肠Ⅱ浙江大学博士学位论文摘要粘膜组织，细胞系及克隆球之间的表达差异。发现Jarid2，Mina，Phf2这3个基因在正常肠粘膜组织，sw480和Sw480一sphere中表达未见明显差异，无明显升高或降低趋势(变化<2倍)。KMT5c在s、w80细胞系中轻度升高1．7倍(职o．05)，而在克隆球中升高至3．3倍(p

4、l洲T7则在sw480细胞系中升高3．1倍(p

5、集的样本中相对细胞系及正常肠粘膜组织表达有明显升高，其在肿瘤发生中的作用有待进一步研究，有可能作为结直肠肿瘤潜在的新型预警及干预标志物。关键词：组蛋白修饰；诱导性多能干细胞；肿瘤干细胞：结直肠癌；PRM[rI’8nIApreliminarystudyonexpressionofhistonemodificationgenesiniPSCandconloncanerstemceUsOncoIogy，ZhejiangUniVersityCoUegeofmedicineobjectiVes：Doctoratecandidate

6、TutorAbstractShiZhongProf．ZhengShuProf．Rongf-uWangWeaimedt0detectttlemRNAexpressionprofileofhistonemodificationgenesiniPSC(iIlducedpluripotentstemcelI)aIldhEScell(humanembryonicstemcell)，andscreenthehistonemodificationgenesthatmightbecriticalinme“reprogramming”pr

7、ocessfromadultceUt0tllepluripotentstate．AndwewillfurtherdetectthemRNAexpressionofselectedgenesmcoloncancerstemcellstoexplorethepotentlalnoVelprognosticmarkersandtherapeutictargetsformalignanttumors·MethodsandResults：Hum柚f6reskinfibroblasts'humaniPSCandhEScellline

8、H9wereculturedunderidenticalstandardconditionsandtotalRNAwereisoIated．MRNAExpressionIevelsof58histonemodincationgenesineachcelllineweredeteminedbyquantitatiVer