子宫内膜癌ⅰ型和ⅱ型mirna表达谱差异的分析

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1、温州医学院硕士学位论文子宫内膜癌Ⅰ型和Ⅱ型miRNA表达谱差异的分析姓名：薛纪森申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：郑飞云2012-05-26温州医学院硕士学位论文子宫内膜癌I型和II型miRNA表达谱差异的分析中文摘要目的近年来越来越多的研究课题表明MicroRNA(miRNA)对于肿瘤的形成起到重要作用，关于其在子宫内膜癌发生发展中所起的作用已经日益成为本学科研究的热点。本课题旨在分析I型子宫内膜癌，II型子宫内膜癌及良性子宫内膜组织问miRNA的表达差异，并构建雌激素依赖型及非雌激素依赖型子宫内膜癌的miRNA基因表达谱，筛选出训‘能与子宫内膜癌发病机制相关的miRNA，为进

2、一步研究子宫内膜癌发生的分子机制提供依据，为恶性肿瘤的基因诊断开拓一条新思路。方法收集2010年1月-2011年1月期间在温州医学院附属第一医院妇科因子宫内膜癌行手术患者的癌灶组织及因子宫肌瘤切除子宫患者的良性内膜组织，共30例子宫内膜癌患者和15例子宫肌瘤患者。术中子宫离体后，即刻无菌操作下切取子宫内膜癌病灶组织，经冰生理盐水冲洗后置液氮中速冻保存。术后病理证实后根据免疫组化法结果分为I型子宫内膜癌组(ER+)，II型子宫内膜癌组(ER一)和良性子宫内膜组。分别提取各组组织总RNA，利用基因芯片检测各组差异表达的miRNh表达谱，芯片使用美国Affymetrix公司最新的GeneChi

3、pemiRNA芯片，数据来自SangermiRBasemiRNAdatabaseV11，并筛选出差异表达最为显著的miRNA，包括miR-449a和miR一449b，然后利用芯片检测后剩余的总RNA进行逆转录PCR和荧光定量PCR实验，进一步验证这两个候选miRNA在芯片结果中差异表达的准确性及验证其在各实验组中差异表达的倍数。结果基因芯片检测发现I型子宫内膜癌组，II型子宫内膜癌组及良性子宫内膜组相互间均有差异表达的miRNA，其中I型子宫内膜癌组与良性子宫内膜组问存在59个表达差异显著(Ratio>1．0)的miRNAs，II型子宫内膜癌组与良性子宫内膜组间存在13个差异表达显著(R

4、atio>1．0)的miRNAs，I型子宫内膜癌组与II型子宫内膜癌组问存在30个差异表达显著(Ratio>1．O)的miRNAs。而相比于I型子宫内膜癌组和良性子宫内膜组，在II型子宫内膜癌组中存在显著下调的miRNA分别有12个和9个，均下调的有miR一449a，miR一449b和miR一20b，显著上调的miRNA分别有18个和4个，均上调的有miR一29a。经过人工筛选后发现miR一449a和miR一449b在II型子宫内膜癌组中的下调最为显著。对这两个候选miRNA进行逆转录PCR和荧光定量PCR验证后发现miR一449a在II型子宫内膜癌组中比I型4温州医学院硕士学位论文子宫

5、内膜癌组及良性子宫内膜组分别下调348倍和288倍，miR一449b则分别下调462倍和424倍。结论I型子宫内膜癌、II型子宫内膜癌和良性子宫内膜组织均存在各自独特的miRNA表达谱，而这种miRNA的表达差异可能与子宫内膜癌的发生发展及其病理类型相关，而miR一449a和miR-449b在II型子宫内膜癌中的显著下调可能与其发病机制有关，可为进一步研究子宫内膜癌发生的分子机制提供依据。[关键词]子宫内膜癌，microRNA，miR一449a／b，基因芯片，荧光定量PCR温州医学院硕士学位论文Expressionprofiles0fmiRNAintype’andIIprofilesin

6、e1an0IendometrialcarcinomaABSTRACTObjectiveRecentlymoreandmorestudiessuggestthattheimportanceofmicroRNA(miRNA)involvedintumorigenesisandtumorprogression，includingcellulardifierentiation，proliferationandapotosis．ResearchonendometrialcarcinomarelatedmiRNAsisbecomingahotpoint．Myresearchisstudingmicr

7、oRNAexpressionpatternsintypeIandIIendometrialcarcinoma(EC)andbenignendometrium，meanwhileprovidesaframeworkonwhichfurtherresearchintonoveldiagnosisandtreatmentofECcanbefocused．MethodsFresh—frozensamplesofendometrialcarc