DB32∕T 2583-2013 饲料中饲用芽孢杆菌的测定

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1、ICS65.120B22备案号：40469-2014DB32江苏省地方标准DB32/T2583-2013饲料中饲用芽孢杆菌的测定DeterminationofBacillusinfeed2013-12-20发布2014-01-20实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T2583-2013前言本标准编写按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准由江苏省农业科学院畜牧研究所、江苏省动物卫生监督所负责起草。本标准主要起草人为宦海琳、周维仁、闫俊书、白群安。DB32/T2583-2013饲料

2、中饲用芽孢杆菌的测定1范围本标准规定了饲料中饲用芽孢杆菌的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、预混料、饲料添加剂中饲用芽孢杆菌的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备GB/T4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定（原文中的参考文献）3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1芽孢杆菌bacillus一类能形成芽孢（内

3、生孢子）的杆状细菌的通称。与饲料工业密切相关的芽孢杆菌主要为芽孢杆菌属(Bacillus)的枯草芽孢杆菌(Bacillussubulis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、短小芽孢杆菌（Bacilluspumilus）、迟缓芽孢杆菌（Bacilluslentus）和短芽孢杆菌属(Brevilbacillus)的侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporus)。3.2菌落数aerobicplatecount饲料检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和

4、培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。4原理取一定量检样的稀释液，将其在80℃下加热10min，涂布在NA琼脂内，于36℃条件下培养48h，菌落计数，算出每g（mL）检样中的芽孢杆菌总数。5设备和材料5.1分析天平感量0.1g，0.1mg。5.2振荡器5.3粉碎机1DB32/T2583-2013非旋风磨，密闭要好。5.4恒温水浴锅5.5恒温培养箱5.6pH计（精确到±0.1个单位）或精密pH试纸5.7灭菌锥形瓶500mL、250mL。5.8无菌吸管1mL（具0.01刻度）、10mL（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。5.9灭

5、菌试管18mm×180mm、15mm×150mm。5.10灭菌玻璃珠5.11灭菌玻璃或塑料培养皿5.12玻璃涂布棒5.13光学显微镜1000倍。6稀释液、培养基和试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，实验室用水采用蒸馏水或去离子水，或相当纯度的水。6.10.85%灭菌生理盐水6.2营养琼脂（NA）培养基参见附录A中的A.1。6.3革兰氏染色液参见附录中的A.2。6.4二乙酰（V-P）测定培养基和试剂参见附录中的A.3。6.5L-阿拉伯糖发酵、D-木糖发酵、D-甘露醇发酵培养基参见附录中的A.4。6.6明胶液化培养基参见附录中的A.5。6.7

6、淀粉水解培养基参见附录中的A.6。6.8丙酸盐利用培养基参见附录中的A.7。6.9柠檬酸盐利用培养基2DB32/T2583-2013参见附录中的A.8。6.10硝酸盐还原培养基和试剂参见附录中的A.9。6.117%氯化钠生长培养基参见附录中的的A.10。6.12厌氧生长测定培养基参见附录中的A.11。7检样的制备按照GB/T14699.1进行采样，采样工具如铲子、匙、采样器、试管等，应是无菌的。样品送到微生物检验室应尽快检验。按照GB/T20195进行检样的制备，样品制备后应尽快检验。8操作步骤8.1试样稀释8.1.1以无菌操作称取试样25g（mL），放

7、于含有225mL0.85%灭菌生理盐水的灭菌三角瓶中（瓶内预置适当数量的玻璃珠），置振荡器上振荡30min，经充分振摇后，制成1：10的均匀稀释液。8.1.2用无菌吸管或微量移液器吸取1mL的1:10稀释液，沿管壁慢慢注入含有9mL灭菌生理盐水的试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管，制成1:100的稀释液。根据样品含菌量，做进一步的十倍系列递增稀释液。8.2接种和培养选择2个-3个适宜的稀释度，水浴80℃±1℃维持10min，每个稀释度吸取0.1mL稀释液接种到两个营养琼脂平板上，使用涂布棒进行表面涂布。涂布好的平皿盖好，置室温中放置15min

8、使接种物完全被琼脂吸收。翻转上述平皿置36℃±1℃培养箱中培养48h±2h。8.